طريقة التخفيف الدقيق للمرق لاختبار حساسية المضادات الحيوية للبكتيريا موجبة الجرام

اعزل المستعمرات البكتيرية موجبة الجرام من صفيحة الاستزراع وتعليقها في وسط.

خفف المعلق لتحقيق التركيز البكتيري الأمثل للمقايس.

تلقيح آبار الاختبار لصفيحة دقيقة تحتوي على تركيزات متزايدة من مضاد حيوي لبغليكوببتيد وبئر للتحكم في النمو يحتوي على الوسط فقط.

انشر حصة من بئر التحكم على ألواح الاستزراع للتحقق من نقاء الثقافة وعدد البكتيريا.

احتضان للسماح بنمو البكتيريا ، حيث يتم تصنيع جدار الخلية.

يرتبط المضاد الحيوي بالببتيدوغليكان ، وهو مكون لجدار الخلية ، وسلائفه ، مما يثبط البلمرة ويضعف الجدار.

يسمح الاضطراب للضغط الاسموزي بالتسبب في تحلل الخلايا.

بعد الحضانة ، تأكد من نقاء الثقافة والعدد الأمثل للبكتيريا.

افحص الآبار بحثا عن نمو البكتيريا.

يظهر بئر التحكم نموا مرئيا ، بينما يشير بئر الاختبار الذي يحتوي على أقل تركيز للمضادات الحيوية يمنع النمو تماما إلى الحد الأدنى من التركيز المثبط (MIC).

في هذا العرض التوضيحي ، سيتم تلقيح طبق واحد طازج. لتحضير اللقاح ، حدد عدة مستعمرات معزولة جيدا من أجار الدم من 18 إلى 24 ساعة أو لوحة أجار أخرى غير انتقائية. هنا ، يتم استخدام مراقبة الجودة S. aureus و E. faecalis السلالات.

المس الجزء العلوي من كل مستعمرة بمسحة معقمة وانقل بعضا منها إلى أنبوب يحتوي على واحد إلى خمسة ملليلتر من CAMHB أو محلول ملحي. استمر في النقل حتى تتطابق العكارة مع معيار 0.5 ماكفارلاند في غضون 15 إلى 30 دقيقة من التحضير ، وقم بتخفيف اللقاح من واحد إلى 100 في CAMHB للوصول إلى تركيز نهائي من خمسة أضعاف 10 إلى وحدة تشكيل مستعمرة خامسة لكل مليلتر. النطاق المقبول هو اثنين إلى ثمانية أضعاف 10 إلى وحدة تشكيل مستعمرة لكل مليلتر.

باستخدام ماصة متعددة القنوات ذات أطراف معقمة على الفور، انقل 50 ميكرولترا من اللقاح النهائي إلى كل بئر مناسب من لوحة لوحة الميكروفون. هنا ، يتم تلقيح أربعة صفوف مع كل من العزلتين ليصبح المجموع أربعة مكررات لكل عزلة. بعد ذلك ، لإجراء فحص النقاء ، استخدم ماصة لنقل واحد إلى 10 ميكرولتر من المحلول في التحكم الإيجابي في النمو إلى أجار غير انتقائي ، مثل أجار الصويا تريبتكاز مع 5٪ من دم الأغنام.

استخدم حلقة معقمة لنشر المحلول على سطح اللوحة. اقلب اللوحة 90 درجة وخطها مرة أخرى للتأكد من توزيع اللقاح بالتساوي. غطي الطبق وضعيه جانبا.

استعدادا لعدد المستعمرات ، استخدم ماصة أحادية القناة لنقل 10 ميكرولتر من المحلول في بئر التحكم في النمو إلى 10 ملليلتر من المزيج الملحي ، ثم انقل 100 ميكرولتر إلى وسط أجار مناسب غير انتقائي ، مثل أجار الصويا التربتيكاز مع 5٪ من دم الأغنام باستخدام حلقة معقمة ، ونشر المحلول على سطح الأجار بالكامل. كرر هذه العملية مرتين في اتجاهات مختلفة لضمان التوزيع المتساوي لللقاح. بعد ذلك ، قم بتكديس ما يصل إلى أربع لوحات ميكروفون في حاوية بلاستيكية لضمان إغلاق اللوحة العلوية بإحكام بغطاء.

ثم ضع منشفة ورقية مبللة داخل الحاوية البلاستيكية وأغلقها بإحكام بالغطاء في غضون 30 دقيقة من التلقيح. احتضان لوحات الميكروفون ولوحة عد المستعمرة ولوحة فحص النقاء في حاضنة الهواء المحيط عند 35 درجة زائد أو ناقص درجتين مئويتين لمدة 16 إلى 20 ساعة. في اليوم التالي ، اقرأ الحد الأدنى للتركيز المثبط على أنه أقل تركيز يمنع تماما نمو البكتيريا في الآبار كما تكتشفه العين المجردة.

حدد عدد المستعمرات على لوحة العد المستعمرة. اضرب الرقم المحسوب في عامل التخفيف. على سبيل المثال ، 50 مستعمرة مضروبة في عامل تخفيف 10 ، 000 يساوي خمسة في 10 إلى CFU الخامس لكل مليلتر.

النطاق المقبول هو 20 إلى 80 مستعمرة ، وهو ما يعادل اثنين إلى ثمانية أضعاف 10 إلى وحدات تشكيل المستعمرة الخامسة لكل مل. يعد تركيز اللقاح متغيرا مهما للتحكم في اختبار الحساسية من أجل الحصول على نتائج دقيقة. أخيرا ، تحقق من لوحة النقاء.

إذا كانت جميع المستعمرات مشابهة للمستعمرات المستخدمة كلقاح ، فيمكن اعتبارها نقية. إذا كانت هناك أي مستعمرات أخرى موجودة ، فهناك احتمال وجود ملوث في لوحة MIC ويجب تكرار الاختبار.