زراعة المتفطرة السلية في ظل ظروف محدودة الحديد

ابدأ بصفيحة أجار تحتوي على مستعمرات المتفطرة السلية المزروعة على وسط غني بالمغذيات.

تلقيح مستعمرة واحدة في مرق مكمل بالمغذيات واحتضان مع التحريض لنمو موحد.

اسمح للثقافة بالوصول إلى المرحلة اللوغاريتمية المتأخرة ، حيث تكون الخلايا نشطة أيضيا.

قم بلصق حجم صغير على صفيحة أجار غنية ، ووزعها بالتساوي ، واحتضنها حتى تتشكل طبقة بكتيرية مستمرة.

بلل مسحة معقمة بوسط الحد الأدنى منخفض الحديد (LIMM) واجمع البكتيريا.

قم بتعليقها في وعاء بلاستيكي يحتوي على LIMM لتجنب تلوث الحديد.

أضف عامل تشتيت لمنع التكتل واحتضان دون اهتزاز.

في ظل ظروف الحد من الحديد ، تنشط البكتيريا استجابات الإجهاد وتنتج سيدروفورات في السيتوبلازم.

يتم تعبئتها في حويصلات خارج الخلية وإطلاقها في المناطق المحيطة.

تلتقط Siderophores الحديد وتساعد البكتيريا على البقاء على قيد الحياة.

يسلط هذا النظام الضوء على التكيف مع البكتيريا الفطرية والبقاء على قيد الحياة في ظل ظروف محدودة الحديد

تلقيح مستعمرة واحدة من MTB في ملليلتر من وسط مرق الفطريات المكمل بتخصيب ADN. احتضان مع التحريض عند 37 درجة مئوية. عندما يكون هناك نمو مرئي ، استخرج ملليلترين من المزرعة وقم بقياس OD 540 على مقياس الطيف الضوئي.

أوقف الحضانة عندما يصل OD 540 إلى 0.8 مما يشير إلى المرحلة اللوغاريتمية المتأخرة. انشر 200 ميكرولتر من الثقافة اللوغاريتمية المتأخرة على ألواح أجار الفطرية المكملة ب 0.2 جلسرين و 0.5٪ توين 80 و ADN. تلقيح ما لا يقل عن خمسة أطباق.

احتضان الأطباق على حرارة 37 درجة مئوية. وبعد أسبوع واحد ، يظهر نمو البكتيريا كطبقة متجمعة. ثم بلل قطعة قطن معقمة في وسط منخفض من الحديد.

استخدم هذه المسحة لجمع البكتيريا من ألواح الأجار. تلقيح البكتيريا في 100 مل من الحد الأدنى من الوسائط منخفضة الحديد في أنبوب. اجمع ما يكفي من البكتيريا لتحضير معلق باستخدام OD 540 من واحد.

قم بتخفيف التعليق 10 مرات إلى لتر واحد مع الحد الأدنى من الحديد المتوسط المنخفض وقسمه إلى زجاجتين بلاستيكيتين معقمين. بعد ذلك ، انقل ملليلترين من المزرعة إلى أنبوب مزرعة سعة خمسة ملليلتر. أضف 10 ميكرولتر من حجم 10٪ من حيث الحجم tyloxapol.

احتضان الثقافات عند 37 درجة مئوية لمدة 14 يوما.