عزل وإثراء الحويصلات خارج الخلية المشتقة من الغشاء الخارجي من البكتيريا

ابدأ بتلقيح مستعمرة من البكتيريا المعدلة وراثيا في وسط سائل.

تعبر هذه البكتيريا عن بروتين اندماج فلوري في الغشاء الخارجي ، وهي طبقة واقية خارجية.

احتضان للبكتيريا لإطلاق الحويصلات خارج الخلية (EVs) ، وهي هياكل نانوية مرتبطة بالغشاء تشارك في الاتصال بين الخلايا ، والتي تتضمن بروتين الفلورسنت.

انقل المزرعة إلى زجاجة وجهاز طرد مركزي بسرعة منخفضة لتكوير الخلايا.

انقل المادة الطافية التي تحتوي على المركبات الكهربائية والبروتينات الخلوية وحطام الخلايا. جهاز طرد مركزي بسرعة عالية ، وإزالة المادة الطافية التي تحتوي على الحطام.

قم بتصفية المادة الطافية من خلال غشاء للتخلص من أي بكتيريا وحطام متبقية.

تلقيح عينة على أجار واحتضانها. يؤكد عدم تكوين المستعمرة البكتيرية عدم وجود البكتيريا.

انقل المحلول إلى جهاز ترشيح فائق مع غشاء شبه نافذ وجهاز طرد مركزي لاحتجاز المركبات الكهربائية مع التخلص من البروتينات الأصغر.

اجمع المركبات الكهربائية المركزة في أنبوب لتحليلها النهائي.

ابدأ بتلقيح مستعمرات مفردة من الإشريكية القولونية في 250 إلى 1000 مل من Luria-Bertani ، أو مرق LB ، باستخدام حلقة معقمة. ثم احتضن المزرعة هوائية في حاضنة اهتزاز بمعدل 300 دورة في الدقيقة و 37 درجة مئوية. بعد 48 ساعة من الحضانة، قم بتوضيح وسط الاستزراع البكتيري عن طريق نقل مزارع الخلايا لتنظيف زجاجات الطرد المركزي المصنوعة من البولي بروبل