العدوى البكتيرية في المختبر للخلايا التائية عن طريق تكوين المشبك المناعي

ابدأ بالآبار التي تحتوي على خلايا CD4 ⁺ T التي تعبر عن مستقبلات خاصة بببتيد البيضاوي أو OVAp.

في بئر التحكم السلبي ، ضع حشوة غشاء مسامي.

في أنبوب ، خذ الخلايا المتغصنة المصابة بالبكتيريا ومحملة ب OVAp لعرض السطح.

أضف الخلايا المتغصنة مباشرة إلى بئر الاختبار وفي الإدخال في بئر التحكم السلبي.

أضف وسائل الإعلام إلى الآبار واحتضانها.

في بئر الاختبار ، تتفاعل الخلايا لتشكيل مشبك مناعي ، مما يسهل نقل البكتيريا من الخلية المتغصنة إلى الخلية التائية ، وهي عملية تعرف باسم العدوى المتحولة.

في بئر التحكم السلبي ، يمنع حاجز الغشاء تفاعل الخلية والخلايا ، وبالتالي يمنع العدوى المتحولة.

أضف المضاد الحيوي الجنتاميسين إلى الآبار واحتضنها.

لا يمكن للجنتاميسين اختراق الخلايا حقيقية النواة ، وبالتالي يقتل البكتيريا غير الداخلية فقط بينما تبقى البكتيريا الداخلية على قيد الحياة.

عينة الاختبار التي تحتوي على الخلايا التائية المصابة وعينة التحكم بالخلايا التائية غير المصابة جاهزة الآن لعزل الخلايا التائية وتقدير العدوى العابرة.

إلى لوحة زراعة 24 بئرا ، أضف مليوني خلية CD4 ⁺ T بحجم 0.5 مل لكل من الآبار الخمسة.

بعد ذلك ، للتحكم في الاتصال الجسدي ، ضع حواجز الآبار العابرة المصنوعة من البولي كربونات بحجم مسام ثلاثة ميكرومتر في الآبار الثالثة والرابعة. أضف إلى البئر الأول 0.1 ملليلتر من الخلايا المتغصنة المصابة المحملة. إلى البئر الثاني ، أضف 0.1 مل من الخلايا المتغصنة المصابة غير المحملة.

أضف 0.1 ملليلتر من الخلايا التغصنية المصابة المحملة بشكل زائد إلى بئر واحد ، و 0.1 ملليلتر من الخلايا التغصنية المصابة غير المحملة إلى البئر الآخر. أخيرا ، كعنصر تحكم سلبي ، يصيب مباشرة البئر الخامس لخلايا CD4 ⁺ T عند وزارة الداخلية 10. بعد ذلك ، ارفع الحجم الإجمالي للبئر إلى 0.6 مل مع RPMI.

احتضن الطبق لمدة 30 دقيقة للسماح بتكوين نقاط الاشتباك العصبي المناعية. بعد الحضانة ، أضف 100 ميكروغرام من الجنتاميسين لكل مليلتر من الوسط إلى كل بئر ، واحتضن لمدة ساعة واحدة. الجنتاميسين هو مضاد حيوي أمينوغليكوزيد غير قادر على اختراق الخلايا حقيقية النواة.

لذلك ، في هذه الخطوة ، سيقتل الأمينوغليكوزيد البكتيريا خارج الخلية ولكن ليس البكتيريا داخل الخلايا.