تقييم ارتباط المكورات الرئوية بالخلايا البطانية البشرية الأولية تحت تدفق الوسائط المستمر

ضع شريحة قناة مطلية بالجيلاتين ، متصلة بمضخة ميكروفلوديك ، على مرحلة المجهر.

تحتوي الشريحة على خلايا بطانية بشرية أولية مزروعة تحت وسائط متدفقة ، مع خيوط من عامل فون ويلبراند أو VWF ، وهو بروتين سكري ، على سطح الخلية.

يتم إنشاء هذه الأوتار عن طريق تحفيز الخلايا بالهيستامين.

تدفق الوسائط المتحكم فيه ، المطبق من خلال مضخة الموائع الدقيقة ، يعزز إفراز VWF وفك اللف. هذا يعرض مجالات ربط محددة على سلاسل VWF.

أوقف تدفق الوسائط ، وأضف جسما مضادا متراكما بالفلوروفور الأخضر ، واستأنف التدفق لتسمية الأوتار بالجسم المضاد.

أوقف تدفق الوسائط مؤقتا وأدخل بكتيريا المكورات الرئوية المعبرة عن البروتين الفلوري الأحمر.

أعد تشغيل التدفق لتوزيع البكتيريا ، مما يتيح الارتباط بالمجالات المكشوفة من خلال الالتصاقات السطحية.

باستخدام الفحص المجهري الفلوري ، تصور الارتباط البكتيري في الوقت الفعلي بالسلاسل.

أوقف تدفق الوسائط واحصل على صور Z-stack لتحديد الارتباط البكتيري بالخلايا البطانية.

للتصور المجهري ، ضع الوحدة السائلة في غرفة التسخين بزاوية 37 درجة مئوية. ضع شريحة القناة على مسرح المجهر الدافئ مسبقا.

التحكم في مورفولوجيا الخلية وسلامة طبقة HUVEC قبل حقن الهيستامين والبكتيريا في الدورة الدموية. حافظ على إعداد التدفق. تحفيز إطلاق VWF من أجسام Palade البطانية القابلة للحياة عن طريق حقن 136 ميكرولتر من محلول مخزون اله