تحليل في الجسم الحي للالتهابات البكتيرية المرتبطة بالزرع باستخدام أجنة الزرد

ابدأ بطبق يحتوي على حجرة الاغاروز المصبوبة بأخاديد.

يحتوي كل أخدود على أجنة أسماك الزرد المخدرة مغمورة في وسط جنين مكمل بعامل مخدر.

تحت المجهر الضوئي ، أدخل إبرة حقن مجهرية في الأنسجة العضلية.

حقن معلق يحتوي على المكورات المجهرية الذهبية والبوليسترين لنمذجة العدوى المرتبطة بالزرع.

انقل الأجنة المحقونة إلى آبار فردية من صفيحة متعددة الآبار مملوءة بوسط طازج واحتضانها.

توفر الكريات المجهرية سطحا ماديا يدعم الاستعمار البكتيري ويعزز العدوى.

لتقييم العدوى البكتيرية المرتبطة بالغرسة، انقل كل جنين إلى أنبوب منفصل واغسله بمخزن مؤقت. أضف خرز سيراميك ومخزن سيراميك.

تجانس لتحلل الأجنة وإطلاق المحتويات الداخلية ، بما في ذلك البكتيريا.

ضع المتجانسات المخففة ، ثم احتضنها للسماح بتكوين المستعمرة.

تظهر الأجنة المحقونة بالغلاف المجهري - المعلق البكتيري عددا أعلى من المستعمرات من تلك التي يتم حقنها بالتعليق البكتيري وحده. يشير هذا إلى أن الكرات المجهرية تزيد من قابلية العدوى.

بعد الانتظار لمدة خمس دقائق حتى يتم تخدير الأجنة ، قم بمحاذاة الأجنة داخل الأخاديد في اتجاه واحد لحقنها. اضبط الحاقن المجهري على إعدادات الحقن المناسبة ، وأدخل الإبرة في الأنسجة العضلية للجنين الأول بزاوية 45 إلى 60 درجة تحت مجهر ستيريو.

حرك الإبرة برفق ذهابا وإيابا لضبط الموضع داخل الأنسجة حسب الضرورة ، واستخدم دواسة القدم الدقيقة لحقن المعلق المحمل. عند حقن معلق مجهري بكتيريا في أنسجة أجنة الزرد ، يجب إدخال الإبرة برفق ولكن بيد ثابتة. بعد الإدخال الناجح ، يجب إنشاء مساحة للمواد قبل الحقن.

والحفاظ على الأجنة في وسط E3 بدون تريكائين في الآبار الفردية من 48 بئرا مع تغييرات متوسطة يومية. لمراقبة تطور العدوى عن طريق القياس الكمي لوحدة تكوين المستعمرة ، قم بنقل خمسة إلى ستة أجنة مصابة قابلة للحياة بشكل عشوائي إلى أنابيب دقيقة فردية سعة ملليلتر بعد فترة وجيزة من الحقن ، واغسل الأجنة برفق باستخدام PBS المعقم. بعد التخلص من الغسالات ، أضف 100 ميكرولتر من PBS المعقم إلى كل أنبوب ، متبوعا باثنين إلى ثلاثة حبات زركونيا معقمة قطرها ملليمتر.

ثم سحق الأجنة في الخالط عند 3,500 دورة في الدقيقة لمدة 30 ثانية ، وزرع المتجانس كما هو موضح.