تحضير لقاح بكتيري أحادي الخلية

خذ ثقافة نشطة أيضيا من المتفطرة مارينوم. هذا يضمن قابلية بكتيرية عالية وحالة فسيولوجية مثالية.

الطرد المركزي للثقافة لبيليه البكتيريا.

تخلص من المادة الطافية الزائدة وأعد تعليق الحبيبات في وسائط جديدة تحتوي على عامل تشتيت.

نقل التعليق إلى أنابيب الطرد المركزي الدقيقة وصوتن في ظل ظروف خاضعة للرقابة.

صوتنة يعطل المجاميع البكتيرية ويشتت الخلايا ، مما يؤدي إلى تعليق خلية واحدة قابل للحياة.

جمع المعلق صوتنة في حقنة وتمريره من خلال مرشح غشاء لإزالة أي كتل متبقية، وضمان مجموعة موحدة من خلية واحدة.

باستخدام مقياس الطيف الضوئي ، قم بقياس الكثافة البصرية للتعليق البكتيري.

قم بتخفيف المعلق بوسائط جديدة تحتوي على واقية من التبريد للوصول إلى التركيز البكتيري المطلوب مع الحفاظ على صلاحية الخلية.

قم بتقسيم التعليق النهائي أحادي الخلية وتخزينه في درجات حرارة منخفضة للغاية. يساعد واقي التبريد في الحفاظ على صلاحية البكتيريا أثناء التخزين طويل الأجل.

بعد التلقيح وفقا للمخطوطة ، قم بالطرد المركزي للثقافة عند 3000 مرة G لمدة 10 دقائق لجمع المتفطرة المرئية كحبيبات. تخلص من جميع المواد الطافية باستثناء 300 ميكرولتر ، وأعد تعليق الحبيبات.

أضف ثلاثة ملليلتر من 7H9 وسط مع 10٪ جلسرين لإعادة تعليق الحبيبات بشكل أكبر ، ثم صوتنة المعلق في حمام مائي بسرعة 100 واط ، مع 15 ثانية و 15 ثانية ، لمدة دقيقتين لتحقيق تجانس خلية واحدة. انقل المعلق البكتيري إلى حقنة 10 ملليلتر ، وقم بالمرور عبر مرشح خمسة ميكرون لإزالة أي كتل بكتيرية. باستخدام مقياس الطيف الضوئي ، قم بقياس الكثافة البصرية للتعليق ، وقم بتخفيفه باستخدام وسائط 7H9 تحتوي على 10٪ جلسرين إلى OD 600 في واحد.

قسم المعلق إلى 10 ميكرولتر ، واحفظه في الفريزر سالب 80 درجة مئوية لاستخدامه مرة أخرى.