موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:48 دقيقة • September 26th, 2025
خذ كوفيت يحتوي على محلول عملي من ثيوفلافين تي ، وهي صبغة فلورية خاصة بالأميلويد ، مذابة في محلول ملحي مخزن بالفوسفات.
ضع الكوفيت في مقياس الطيف الفلوري وسجل إشارة التألق الأساسية.
أوقف المسح مؤقتا وقم بإزالة الكوفيت.
أضف المادة الطافية المعقمة بالمرشح التي تم جمعها من الخلايا البطانية الرئوية المصابة ببكتيريا الزائفة الخبيثة.
يحتوي المادة الطافية على مجاميع الأميلويد ، وهي بروتينات غنية بصفائح بيتا غير مطوية بشكل خاطئ.
امزج المحتويات برفق عن طريق الانعكاس لضمان توزيع موحد.
أعد تحميل الكوفيت في مقياس الطيف الفلوري واستأنف المسح للحصول على إشارة مضان قائمة على الوقت.
يرتبط Thioflavin T على وجه التحديد بالأميلويدات الغنية بصفائح بيتا ، مما يؤدي إلى تعزيز التألق.
قم بإجراء فحص مضان باستخدام نفس الإعدادات.
تشير الزيادة في التألق بالنسبة لخط الأساس إلى وجود ووفرة نسبية للأميلويدات التي يسببها العدوى في المادة الطافية للثقافة.
لتحديد كمية الأميلويدات داخل المادة الطافية ، أضف 20 ميكرولتر من محلول مخزون 50X thioflavin T المحضر حديثا والمصفى إلى مليلتر واحد من PBS في كوفيت مقياس الطيف الضوئي بملليلتر واحد ، وقم بتحميل العينة المخففة على مقياس الطيف الفلوري.
قم بقياس انبعاث التألق الأساسي باستخدام إثارة 425 نانومتر. مسح انبعاث التألق من 450 إلى 575 نانومتر بزيادتين نانومتر. ثم اضبط الجهاز لإجراء مسح بف
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية