موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 3:14 دقيقة • September 26th, 2025
خذ طبقة أحادية من الخلايا البطانية الرئوية للفئران.
اغسل الخلايا مع المخزن المؤقت. أضف معلقا من Pseudomonas aeruginosa واحتضن.
أثناء الحضانة ، تتصل البكتيريا بالخلايا وتحقن بروتينات المستجيبة في السيتوبلازم.
تؤدي هذه البروتينات المستجيبة إلى انهيار الأنابيب الدقيقة واضطراب الهيكل الخلوي.
ينشط اضطراب الهيكل الخلوي استجابات الإجهاد الخلوي ، مما يؤدي إلى تكوين مجاميع البروتين غير المطوية والسامة للخلايا - قلة الأميلويد.
تخلق البروتينات المستجيبة أيضا مسامات في غشاء الخلية ، مما يسمح بإطلاق قلة الأميلويد في الفضاء خارج الخلية.
بالإضافة إلى ذلك ، فإن اضطراب الهيكل الخلوي يغير مورفولوجيا الخلايا ، مما يخلق فجوات بين الخلايا في الطبقة الأحادية البطانية.
بعد ذلك ، راقب الطبقة الأحادية تحت المجهر الضوئي. بمجرد أن تصبح الفجوات بين الخلايا واضحة ، قم بإنهاء الحضانة.
بعد ذلك ، اجمع المادة الطافية التي تحتوي على أميلويدات سامة للخلايا ، وجهاز طرد مركزي لحبيبات الحطام.
اجمع المادة الطافية وقم بتصفيتها لإزالة أي بكتيريا متبقية.
المادة الطافية المحصودة التي تحتوي على الأميلويدات السامة للخلايا جاهزة لمزيد من التحليل.
لإنتاج مادة طافية سامة للخلايا ، اغسل طبقا طوله 150 سم من الخلايا البطانية باستخدام HBSS ، وقم بتخفيف مستعمرة P. aeruginosa إلى امتصاص 0.25 عند 540 نانومتر. قم بتخفيف الخلايا البكتيرية للسماح بت
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية