تتبع ديناميكيات العدوى البكتيرية في الفأر باستخدام التلألؤ البيولوجي

ابدأ بتعليق سلالة موهنة من البكتيريا المسببة للأمراض.

تظهر السلالة الموهنة انخفاض الإمراضية بسبب عمليات الحذف المستهدفة في جينات الضراوة.

يتم تصنيف البكتيريا كروموسوميا باستخدام أوبرون مضيء بيولوجي يتيح إنتاج الضوء المستقل.

تعبر البكتيريا عن أوبرون الإضاءة الحيوية ، وتنتج إنزيم لوسيفيراز ومركب إنزيم يصنع ركيزة لوسيفيراز.

يؤكسد Luciferase الركيزة لإنتاج ضوء مرئي.

قم بالطرد المركزي للتعليق وتخلص من المادة الطافية.

اغسل الخلايا بمخزن مؤقت ، وجهاز طرد مركزي مرة أخرى ، وتخلص من المادة الطافية لإزالة المكونات غير الخلوية المتبقية.

أعد تعليق الخلايا في المخزن المؤقت لتحقيق التركيز البكتيري الأمثل وسحب المعلق في حقنة.

قم بحقن المعلق داخل الصفاق في الماوس ، ثم انقله إلى قفص.

تصور إشارة الإضاءة الحيوية على فترات منتظمة.

تظل السلالة الموهنة موضعية ، وينخفض التلألؤ البيولوجي تدريجيا ، مما يشير إلى إزالة العدوى.

في صباح يوم الحقن ، قم بإذابة التبريد للخلايا البكتيرية عند أربع درجات مئوية لمدة ثلاث إلى أربع ساعات. احتفظ بالقوارير على الجليد بعد الذوبان وحقن الفئران في غضون ساعتين. انقل محتويات كل مبرد إلى أنبوب جديد سعة ملليلتر وقم بالطرد المركزي عند 4,500 مرة G لمدة 10 دقائق.

تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق حبيبات الخلية في مليلتر واحد من PBS. كرر الطرد المركزي وأعد تعليق الخلايا في PBS إلى تركيز نهائي قدره 2.5 في 10 إلى وحدات تشكيل المستعمرة التاسعة لكل مليلتر. خذ ثلاث عينات من التعليق النهائي لكل سلالة للتحقق من صحة التركيز والنمط الجيني والنمط الظاهري.

لكل سلالة ، قم بتقسيم 1.5 مل من تعليق الخلية في أنبوب سعة ملليلتر وإعداد PBS لحقن التحكم. اجمع الفئران والمواد اللازمة للحقن في غرفة جراحية معقمة للحيوانات وامسح جميع الأسطح بمناديل معقمة قبل البدء. ارتد زوجين من قفازات اللاتكس للحد من خطر الثقب ، في حالة العض ، بالإضافة إلى معطف المختبر ونظارات السلامة وقناع الوجه.

أخرج الماوس من القفص وقم بوزنه ، مع وضع علامة على الذيل بعلامة دائمة لتتبع ما بعد الحقن. افتح حقنة جديدة سعة ملليلتر واحد بإبرة قياس 27 وارسم 200 ميكرولتر من PBS المعقمة. أمسك الماوس خلف أذنيه ، باستخدام الإبهام والسبابة ، واضغط لإنشاء طية جلدية في مؤخرة العنق.

بعد ذلك ، قم بتثبيت الذيل في راحة اليد باستخدام الخنصر لتثبيت الماوس بشكل مسطح وغير متحرك. أدخل الإبرة بزاوية 30 درجة في التجويف البريتوني إلى يسار أو يمين خط الوسط. ارفع الإبرة قليلا للتأكد من عدم إدخالها في الأعضاء.

ثم قم بحقن PBS ببطء واسحب الإبرة. البلعة في موقع الحقن نموذجية. ضع الإبرة في حاوية التخلص من الأدوات الحادة المخصصة وانقل الماوس إلى قفص منفصل.

كرر الإجراء مع الماوس التالي وبعد حقن جميع الفئران من قفص واحد ، أعيدها إلى قفصها الأصلي. بعد حقن المجموعة الضابطة ، قم بحقن مجموعات الاختبار باستخدام نفس الإجراء. بمجرد اكتمال جميع عمليات الحقن ، أعد الفئران إلى غرفة السكن ونظف منطقة العمل بمناديل معقمة.

اضبط تدفق الأكسجين على 1.5 لتر في الدقيقة والأيزوفلوران على 3.5٪ وانقل الماوس إلى غرفة التخدير ، ثم إلى مرحلة استقرار درجة الحرارة ، بعد التخدير. ضع الفأر على ظهره مع ذراعيه ممدودتين وقم بتركيب مخروط الأنف لإعطاء 2.5٪ من الأيزوفلوران أثناء التصوير.

أغلق الباب والتقط صورا مضيئة بيولوجيا وأشعة سينية للماوس. عند اكتمال التصوير ، أعد الماوس إلى قفصه وراقبه. يجب أن يستعيد وعيه في غضون ثلاث إلى خمس دقائق.