تتبع ديناميكيات العدوى البكتيرية في الفأر باستخدام التلألؤ البيولوجي

ابدأ بتعليق سلالة موهنة من البكتيريا المسببة للأمراض.

تظهر السلالة الموهنة انخفاض الإمراضية بسبب عمليات الحذف المستهدفة في جينات الضراوة.

يتم تصنيف البكتيريا كروموسوميا باستخدام أوبرون مضيء بيولوجي يتيح إنتاج الضوء المستقل.

تعبر البكتيريا عن أوبرون الإضاءة الحيوية ، وتنتج إنزيم لوسيفيراز ومركب إنزيم يصنع ركيزة لوسيفيراز.

يؤكسد Luciferase الركيزة لإنتاج ضوء مرئي.

قم بالطرد المركزي للتعليق وتخلص من المادة الطافية.

اغسل الخلايا بمخزن مؤقت ، وجهاز طرد مركزي مرة أخرى ، وتخلص من المادة الطافية لإزالة المكونات غير الخلوية المتبقية.

أعد تعليق الخلايا في المخزن المؤقت لتحقيق التركيز البكتيري الأمثل وسحب المعلق في حقنة.

قم بحقن المعلق داخل الصفاق في الماوس ، ثم انقله إلى قفص.

تصور إشارة الإضاءة الحيوية على فترات منتظمة.

تظل السلالة الموهنة موضعية ، وينخفض التلألؤ البيولوجي تدريجيا ، مما يشير إلى إزالة العدوى.

في صباح يوم الحقن ، قم بإذابة التبريد للخلايا البكتيرية عند أربع درجات مئوية لمدة ثلاث إلى أربع ساعات. احتفظ بالقوارير على الجليد بعد الذوبان وحقن الفئران في غضون ساعتين. انقل محتويات كل مبرد إلى أنبوب جديد سعة ملليلتر وقم بالطرد المركزي عند 4,500 مرة G لمدة 10 دقائق.

تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق حبيبات الخلية في مليلتر واحد من PBS. كرر الطرد المركزي وأعد تعليق الخلايا في PBS إلى تركيز نهائي ق