JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 2:36 د • September 26th, 2025
ابدأ بقارورة تحتوي على زنبرك ومليئة بوسط غني بالمغذيات يدعم دورة الحياة الكاملة لبكتيريا Streptomyces venezuelae .
قم بتلقيح الجراثيم البكتيرية في الوسط واحتضانها بالرج لضمان التهوية المناسبة وتوزيع العناصر الغذائية.
يعزز الزنبرك الخلط ويدعم النمو المنتظم والمتسق.
تمتص الجراثيم العناصر الغذائية وتنبت ، وتنتج أنابيب جرثومية تمتد عند أطرافها ، وتتفرع إلى خيوط ، وتتطور إلى بنية فطرية.
عندما تصبح العناصر الغذائية محدودة ، ينتج الكائن الحي خيوط أبواغية خاصة تقسم وتنتج جراثيم وخلايا تناسلية نائمة.
راقب تحت مجهر تباين الطور لتأكيد وجود شظايا الفطريات والجراثيم.
قم بالطرد المركزي للثقافة لإزالة الحطام الفطري الأثقل ، تاركا جراثيم أخف في المادة الطافية.
انقل المادة الطافية إلى أنبوب دقيق وضعها على الثلج لمنع الإنبات المبكر.
قم بتخفيف تعليق البوغ في وسط جديد وتخزينه في ظروف باردة حتى الاستخدام مرة أخرى.
تلقيح 30 مل من وسط النمو المكمل ب 10 ميكرولتر من الجراثيم من سلالة S.venezuela ليتم تصويرها. لنمو الخلايا وتبويغها بشكل مستمر ، استخدم قارورة محيرة أو قارورة تحتوي على زنبرك للسماح بتهوية كافية.
زراعة الخلايا لمدة 35 إلى 40 ساعة عند 30 درجة مئوية و 250 دورة في الدقيقة. عندما تكون جاهزا ، يجب أن تكون قادرا على رؤية شظايا الفطريات والجراثيم عبر الفحص المجهري للتباين الطور المثبت على السائل. قم بالطرد المركزي ملليلتر واحد من المزرعة في جهاز طرد مركزي منضدية عند 400 مرة G لمدة دقيقة واحدة لبيلة الفطريات وشظايا الخلايا الكبيرة.
ثم انقل ما يقرب من 300 ميكرولتر من المادة الطافية التي تحتوي على تعليق من الجراثيم ، إلى أنبوب جديد 1.5 ملم وضع الأنبوب على الجليد.