JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 3:07 د • September 26th, 2025
خذ غطاء بطبقة هيدروجيل قابلة للتحلل تحتوي على مستعمرات بكتيرية محاصرة ، معدلة وراثيا لإصدار التألق.
ضع الغطاء في حامل.
أضف وسائط لمنع جفاف العينة.
تحت مجهر المجال الساطع ، ركز على مستعمرة واحدة ذات أهمية.
باستخدام البرنامج المناسب ، صمم نمطا ضوئيا لاستخراج الخلايا في محيط المستعمرة لتحطيم الروابط الهيكلية للهيدروجيل وتقليل التعرض للأشعة فوق البنفسجية للخلايا.
اضبط شدة ضوء الأشعة فوق البنفسجية ومدة التعرض.
ابدأ التعرض للأشعة فوق البنفسجية لكسر الروابط الهيكلية في الهيدروجيل في المناطق المكشوفة التي تسهل إطلاق المستعمرة المستهدفة.
باستخدام مرشح مضان ، حدد المستعمرة.
ضع طرف أنبوب في المكان ، مع توصيل الطرف الآخر بحقنة.
قم بالتبديل إلى وضع الحقل الساطع ، وباستخدام المحقنة ، قم بشفط المستعمرة التي تم تحريرها.
انقل المستعمرة إلى أنبوب لمزيد من التحليل.
ضع العينة في حامل PDMS وأضف الوسائط المحددة أعلى العينة لمنع جفاف العينة وتوفير محلول ناقل للخلايا التي تم تحريرها. بعد وضع مرآة المعايرة في موضعها ، اضبط تركيز المجهر للحصول على صورة حادة للمستعمرات داخل مجموعة الهيدروجيل أو الميكروويل وفحصها لتحديد المستعمرات أو الآبار ذات الأهمية.
هنا ، صمم أنماط الضوء بينما يعرض عرض الكاميرا المستعمرات داخل العينة لاختبار أنماط مختلفة لاستخراج الخلايا وحفظ النمط المحدد. ثم حدد قسم التحكم في الجلسة، وأضف التسلسل المحفوظ أسفل علامة التبويب التي تحمل اسم منتج أداة الإضاءة المزخرفة. حدد خيار تحفيز النمط لعرض موقع التعريض الضوئي المطلوب وضبطه.
بعد ذلك ، اضبط شدة الضوء على 60٪ ووقت التعرض إلى 40 ثانية أسفل علامة التبويب التحكم LED وابدأ عملية التعرض. راقب تدهور الهيدروجيل في الوقت الفعلي ووضع Brightfield لضمان تحرير الخلية. لجمع الخلية التي تم تحريرها ، قم بتغيير مرشح المجهر من Brightfield إلى TRITC لتصور المنطقة المكشوفة من العينة بالعين المجردة.
بمجرد تحديد المنطقة المكشوفة ، ضع نهاية الأنبوب على البقعة المشععة ، ثم قم بتغيير مرشح المجهر مرة أخرى إلى Brightfield لمراقبة استرجاع الخلايا في الوقت الفعلي. استخدم المحقنة المرفقة بالطرف الآخر من الأنبوب لسحب 200 ميكرولتر من المحلول الذي يحتوي على الخلايا التي تم إطلاقها بعناية ونقل المحلول إلى أنبوب طرد مركزي 1.5 ملم لتحليل الحمض النووي أو الطلاء