قياس كمية الألجينات البكتيرية باستخدام مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم القائم على الأجسام المضادة

خذ صفيحة دقيقة مع عينة تحتوي على الجينات ، وهي عديدات السكاريد الخارجية الواقية التي تنتجها بكتيريا Pseudomonas aeruginosa.

قم بإعداد تخفيف تسلسلي لمعيار مشتق من الجينات لقياس تركيز ألجينات العينة.

أضف عازلة طلاء واحتضان لتسهيل التصاق الجزيئات بسطح البئر.

اغسل لإزالة الجزيئات غير المرتبطة.

احتضان بعامل حظر لإخفاء مواقع الربط غير المحددة.

اغسلها ثم احتضنها بالأجسام المضادة الأولية الخاصة بالألجينات.

اغسلها مرة أخرى ، ثم احتضن بالأجسام المضادة الثانوية المقترنة بالإنزيم التي تستهدف الأجسام المضادة الأولية.

اغسل ثم احتضان بركيزة كروموجينية ، والتي يتأكسدها الإنزيم لإنتاج منتج ملون.

أضف محلولا حمضيا يوقف التفاعل ويعزز اللون لتمكين الكشف عن القياس اللوني.

باستخدام قارئ microplate ، قم بقياس كثافة اللون.

قم بإنشاء منحنى قياسي من شدة التخفيفات القياسية ورسم شدة العينة لتحديد تركيز الألجينات.

باستخدام ماصة دقيقة ، أضف 50 ميكرولتر من العينة التي تم جمعها إلى طبق 96 بئرا غير معالج.

ثم أضف 50 ميكرولتر من المخزن المؤقت لطلاء ELISA إلى الآبار. احتضان الطبق على حرارة 37 درجة مئوية لمدة ساعتين. باستخدام زجاجة بخ ، اغسل آبار الطبق مرتين باستخدام PBS-T عن طريق ملء الآبار ثم تجفيفها عن طريق قلب اللوحة.

أضف 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت الحاجب إلى الآبار باستخدام ماصة دقيقة واحتضان عند أربع درجات مئوية طوال الليل