نمذجة استعمار الفئران المهبلي بواسطة البكتيريا اللاهوائية

خذ أنثى الفأر المعالجة بهرمون يشطب البيئة المهبلية ، مما يزيد من قابليتها للإصابة بالعدوى.

ارفع الماوس من ذيله بينما يمسك القفص بقدميه الأمامية لرفع الأرباع الخلفية وفضح فتحة المهبل.

اشطف التجويف المهبلي باستخدام عازل لاهوائي لطرد المخاط ، وهو حاجز وقائي ضد مسببات الأمراض ، جنبا إلى جنب مع الخلايا الظهارية الميتة ، والميكروبات المهبلية الذاتية.

قم بتلقيح المهبل على الفور بتعليق من مسببات الأمراض البكتيرية اللاهوائية ، مع إبقاء الفأر مقيدا لتقليل فقدان السوائل.

للتلقيح المشترك ، يتم تطبيق معلق لمسببات الأمراض البكتيرية اللاهوائية الأخرى باستخدام نفس الحجم كما كان من قبل.

ضع الفأر الملقح بشكل منفصل عن الفئران غير الملقحة لمنع انتقال التلوث.

بعد التلقيح ، تلتصق البكتيريا بالظهارة المهبلية ، وتنمو لتصبح مستعمرات ، وتطور طبقة واقية من الأغشية الحيوية تعمل كحاجز ضد الاستجابات المناعية للمضيف.

قم بإعداد أنابيب الغسيل المهبلية في الغرفة اللاهوائية عن طريق سحب 70 ميكرولتر من PBS اللاهوائي المعقم في أنابيب طرد مركزي دقيقة سعة 1.5 مليلتر تحمل أرقام الفئران.

أغلق الأنابيب بإحكام وأخرجها من الغرفة. لإجراء غسل المهبل ، أولا ، ضع فأرا فوق قفص يمكنه الإمساك به بمخالبه الأمامية. بعد ذلك ، أمسك الجزء الأوسط من الذيل برفق وارفعه بحيث تكون الأرباع الخلفية مرتفعة قليلا وتتعرض فتحة المهبل.

بعد سحب 50 ميكرولتر من PBS من أنبوب الغسيل المسمى ، أدخل طرف الماصة برفق من ملليمترين إلى ثلاثة ملليمترات في تجويف المهبل لغسله باستخدام PBS عن طريق سحب الماصة للداخل والخارج ثلاث إلى أربع مرات. بعد ذلك ، انقل مادة الغسيل مرة أخرى إلى أنبوب الغسيل الأصلي مع 20 ميكرولتر المتبقية من PBS غير المستخدمة. مباشرة بعد هذا الغسيل المهبلي ، قم بتلقيح كل فأر عن طريق نقل 20 ميكرولتر من التعليق البكتيري أو التحكم في السيارة عن طريق المهبل.

لتجارب التلقيح المشترك مع سلالتين بكتيريتين مختلفتين ، قم بالتلقيح بشكل منفصل ب 10 ميكرولتر من كل معلق بكتيري ، بدلا من خلط السلالات مسبقا. لمنع الحجم المدار من التراكم على الفور في المقطع المهبلي ، استمر في رفع الجزء الخلفي من الفأر لمدة 10 إلى 20 ثانية. انقل الفأر الملقح إلى قفص جديد أو مع رفقاء القفص الملقحين بالفعل ، وكرر الإجراء مع الفئران الأخرى.