التوصيل الموضعي للبكتيريا إلى تجويف الأمعاء ليرقة سمك الزرد باستخدام الحقن المجهري

خذ طبقا يحتوي على يرقة الزرد المخدرة.

ضعي قطرة من الاغاروز منخفض الذوبان على اليرقة وضعيها برفق بشكل جانبي للسماح بدخول الأمعاء أثناء الحقن.

الآن ، قم بتبريد الاغاروز لفترة وجيزة لتصليبه ، وبالتالي شل حركة اليرقة.

أضف وسائط تحتوي على عامل مخدر للحفاظ على اليرقة تحت التخدير.

بعد ذلك ، خذ معلقا من المطثية العسيرة المسمى بالفلورسنت ، وهي بكتيريا مسببة للأمراض ، وأضف صبغة تتبع لتسهيل مراقبة الحقن.

قم بتحميل هذا الخليط في إبرة حقن مجهرية وقم بتركيب الإبرة على معالج دقيق.

تحت المجهر الفراغي ، ضع الإبرة بزاوية موجهة نحو الأمعاء اليرقاتية.

ثم أدخل طرف الإبرة برفق في تجويف الأمعاء.

حقن البكتيريا مباشرة في التجويف وتأكد من التسليم الناجح باستخدام صبغة التتبع. ثم اسحب الإبرة.

باستخدام الفحص المجهري الفلوري ، تأكد من توطين المطثية العسيرة في الأمعاء اليرقات.

أولا ، ضع قطرة من الاغاروز منخفض الذوبان بنسبة 0.8٪ على يرقات سمك الزرد في طبق بتري لتغطيتها. اضبط اليرقات برفق على وضع جانبي. ضع طبق بتري على الثلج لمدة 30 إلى 60 ثانية للسماح للأغاروز منخفض الذوبان بالتجمد.

أضف 30٪ وسط دانيو يحتوي على 0.02٪ إلى 0.04٪ تريكائين لتغطية الاغاروز. لتحضير محلول الحقن ، أضف ميكرولتر واحد من 0.5٪ فينول أحمر في محلول PBS إلى تسعة ميكرولتر من لقاح المطثية العسيرة الملطخ بالصبغة. قم بتحميل إبرة الحقن المجهري المعايرة بمحلول الحقن باستخدام محمل دقيق.

قم بتركيب الإبرة المحملة في جهاز تجميل دقيق ، وضعها تحت مجهر ستيريو. اضبط ضغط الحقن بين 600 و 900 هيكتوباسكال. اضبط وقت الحقن على 0.1 إلى 0.3 ثانية للحصول على 0.5 إلى 1.0 نانولتر.

اضبط الإبرة في المعالج الدقيق بزاوية 45 درجة تقريبا ، مشيرا إلى اليرقات المدمجة. ضع طرف الإبرة فوق الجهاز الهضمي ، بالقرب من المسام البولية التناسلية. اخترق من خلال الاغاروز ، ثم العضلات بطرف الإبرة.

ثم أدخله في تجويف الأمعاء ، وحقن 0.5 إلى 1.0 نانولتر من المطثية العسيرة. استخدم مجهر مضان لمراقبة اليرقات المحقونة ، واستخدم طرفا مرنا للودر الدقيق لالتقاط اليرقات المحقونة بشكل صحيح للتصوير متحد البؤر.