نمو البكتيريا على شريحة الموائع الدقيقة لدراسة مقاومة أدوية المضادات الحيوية

خذ رقائق الموائع الدقيقة مع غرف النمو والأدوية مفصولة بصمام ميكانيكي دقيق.

قم بتحميل سلالات الإشريكية القولونية الطافرة من النوع البري والمقاومة ل TMP ، المعلقة في الوسط ، في غرف النمو باستخدام الضغط ، حيث يكون تريميثوبريم (TMP) هو المضاد الحيوي الذي تم اختباره.

بعد ذلك ، قم بتحميل غرف الدواء بوسائط تحتوي على تركيز منخفض من TMP للحث على الإجهاد الخلوي في البكتيريا.

قم بتشغيل الصمام الميكانيكي الدقيقي للسماح بانتشار TMP في غرف النمو ، مما يتيح دخول TMP إلى البكتيريا.

ضع الرقائق داخل الحاضنة المثبتة على مرحلة المجهر المقلوب وابدأ التصوير بفاصل زمني.

في النوع البري الإشريكية القولونية ، يرتبط TMP بإنزيم اختزال ثنائي هيدروفولات ، مما يمنع ارتباط ثنائي هيدروفولات ويسبب خيوطا ناتجة عن الإجهاد ويقلل من التكاثر البكتيري.

ومع ذلك ، فإن بنية DHFR المتغيرة للسلالة المتحولة تمنع ارتباط TMP ، مما يسمح بالتكاثر الطبيعي.

راقب صور الفاصل الزمني.

الإشريكية القولونية من النوع البري تظهر خيوطا وتكاثر منخفض تحت علاج TMP ، بينما تظهر السلالة المتحولة مورفولوجيا وتكاثر طبيعيين ، مما يشير إلى مقاومة المضادات الحيوية.

بعد إذابة العينة المجمدة يوميا في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق ، قم بتلقيح أنبوب اختبار جديد بوسط M9 جديد.

ضع العينة في حاضنة اهتزاز على حرارة 37 درجة مئوية طوال الليل. في اليوم التالي ، استخدم وسيط M9 لتخفيف العينة الميكروبية عشرة أضعاف وتحميلها في جهاز الموائع الدقيقة عن طريق الضغط على حاوية العينة الميكروبية عند خمسة رطل لكل بوصة مربعة. ثم قم بتحميل الوسيط المحتوي على TMP في الرقاقة عن طريق الضغط على M9 مع حاوية TMP عند خمسة رطل لكل بوصة مربعة.

قم بتنفيذ الخلط بين الميكروب والدواء عن طريق تشغيل الصمام الميكانيكي الدقيقي بين الغرفتين على شريحة الموائع الدقيقة لمدة 15 دقيقة. أخيرا ، ضع رقاقة الموائع الدقيقة في حاضنة المجهر المثبتة على المجهر المقلوب. باستخدام كاميرا CCD ، احصل على صور الخلية في غرفة النمو كل ساعة لمدة ثماني ساعات.

احسب بيانات رقم الخلية وفقا لبروتوكول النص.