JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 2:49 د • September 26th, 2025
ضع شريحة ميكروآري معقمة مطلية بالاغاروز مع بقع بوليمر متعددة في صفيحة متعددة الآبار. يقلل الاغاروز من الارتباط البكتيري غير المحدد.
أضف ثقافة بكتيرية مختلطة إلى الشريحة واحتضنها بتحريض لطيف.
تفرز البكتيريا بروتينات التصاق مميزة ترتبط ببقع البوليمر المواتية ، مما يؤدي إلى ارتباط بكتيري أقوى واستعمار بمرور الوقت.
على العكس من ذلك ، تقاوم البوليمرات الطاردة امتصاص البروتين وتقلل من الارتباط البكتيري.
اشطف الشريحة بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات أو PBS لإزالة البكتيريا غير المرتبطة.
أضف DAPI لتلطيخ الحمض النووي للبكتيريا المتصلة بالسطح.
اغسل الشريحة باستخدام PBS ، وجففها ، وأغلقها بغطاء لاصق.
تعقيم سطح الشريحة الخارجية بالإيثانول.
التقط صورا ذات مجال ساطع لتحديد موقع بقع البوليمر. بعد ذلك ، قم بالتبديل إلى وضع التألق للكشف عن التألق على بقع البوليمر.
تشير بقع البوليمر التي تظهر مضانا منخفضا إلى الحد الأدنى من الارتباط البكتيري ويتم تحديدها على أنها بوليمرات طاردة للبكتيريا.
بعد زراعة وتحضير اللقاح للمصفوفات الدقيقة ، وفقا لبروتوكول النص ، ضع مصفوفات البوليمر الدقيقة المعقمة بالأشعة فوق البنفسجية في ألواح مستطيلة من أربعة آبار وأضف ستة ملليلتر من الثقافات البكتيرية المختلطة. احتضان الأطباق عند 37 درجة مئوية مع تحريض لطيف لمدة خمسة أيام. بعد الحضانة ، استخدم PBS لشطف المصفوفات الدقيقة برفق مرتين.
ثم أضف ميكروغرام واحد لكل مليلتر من DAPI في PBS واحتضنه لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك ، انقل المصفوفات الدقيقة إلى لوحة جديدة بأربعة آبار ، وقم بتغطية المصفوفات الدقيقة باستخدام PBS ثم قم بالتدوير برفق. ثم قم بتغيير PBS مرة واحدة وكرر الغسيل.
بعد الشطف ، جفف المصفوفات الدقيقة تحت تدفق الهواء ثم ضع طبقة مانعة للتسرب وقم بتثبيت زلات الغطاء الزجاجي على شرائح المصفوفات الدقيقة. عندما يجف الغراء ، استخدم 70٪ إيثانول لتعقيم السطح الخارجي. باستخدام مجهر مضان ، مزود بشخصية 20x ، التقط صورا مفردة لكل بقعة بوليمر في المجال الساطع وقنوات DAPI.