تحضير لقاح الإشريكية القولونية النزفية بيولوجيا

ابدأ بمخزون مجمد من الإشريكية القولونية المعوية النزفية أو EHEC ، وهي بكتيريا معوية مسببة للأمراض.

تحمل هذه البكتيريا بلازميدا يعبر عن لوسيفيراز للتصوير الحيوي في الوقت الفعلي وجين مقاومة للمضادات الحيوية للاختيار.

ضع البكتيريا على صفيحة أجار تحتوي على المضاد الحيوي المناسب واحتضان لعزل المستعمرات الفردية الحاملة للبلازميد.

اختر مستعمرة واحدة وقم بزراعتها في مرق مكمل بالمضادات الحيوية. احتضان لتكاثر مجموعة سكانية موحدة وراثيا ومستقرة من البلازميد.

قم بتوسيع المزرعة في ظل ظروف التهوية لمزامنة الخلايا في النمو اللوغاريتمي.

راقب نمو البكتيريا حتى الوصول إلى الكثافة البصرية المطلوبة.

بعد ذلك ، قم بالطرد المركزي للثقافة لحبيبات البكتيريا.

قم بإزالة المادة الطافية ، واغسل الحبيبات بمحلول ملحي معقم.

جهاز طرد مركزي مرة أخرى. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات في كمية أصغر من المحلول الملحي.

هذا التعليق EHEC المركز جاهز الآن للتتبع القائم على التلألؤ البيولوجي.

للبدء ، قم بوضع مخزون سالب 80 درجة مئوية من بكتيريا الإشريكية القولونية O157 H7 EDL933 التي تحتوي على بلازميد لوسيفيراز على صفيحة أجار LB مع 50 ميكروغراما لكل مليلتر من الكاناميسين. تنمو البكتيريا لمدة 16 إلى 18 ساعة عند 37 درجة مئوية. اختر مستعمرة واحدة من اللوحة الليلية وقم بتلقيح ثلاثة ملليلتر من وسط LB ب 50 ميكروغراما لكل مليلتر من