نظام زراعة مشتركة لدراسة الاستجابات الجزيئية لمضيفات النبات والبكتيريا المتفاعلة

خذ خزانا يحتوي على وسط نمو معقم مع درجة حموضة حمضية.

انقل شاشة شبكية مع شتلات نباتية إلى الخزان.

أغلقه بغطاء وشريط مسامي للحفاظ على التعقيم مع السماح بالتبادل الغازي.

احتضان بالرج لتهوية الوسط.

افحص الوسيط للتحقق من عدم وجود غيوم ، مما يشير إلى عدم وجود تلوث بكتيري.

ضع عينة على صفيحة مزرعة واحتضنها لملاحظة نقص نمو البكتيريا ، مما يؤكد عدم وجود بكتيريا ملوثة.

التلقيح ب Agrobacterium ، وهو مسببات أمراض نباتية ، واحتضن.

تعمل جزيئات الإشارات المشتقة من الجذور النباتية ودرجة الحموضة الحمضية على تنشيط بروتين مستشعر مرتبط بالغشاء البكتيري.

يؤدي التنشيط إلى التعبير الجيني ، مما ينتج عنه بروتينات للارتباط البكتيري بأسطح الجذور.

بعد التعلق ، تقوم Agrobacterium بتوصيل جزء من الحمض النووي ، يعرف باسم نقل الحمض النووي (T-DNA) ، إلى الخلايا النباتية عبر نظام إفراز.

عند الاندماج في جينوم النبات ، يقوم T-DNA بتصنيع جزيئات الإشارات التي تعزز الاستعمار البكتيري.

في غطاء تدفق معقم ، صب 18 مل من وسط MS السائل المعقم في خزانات زجاجية أسطوانية معقمة بأغطية معقمة.

بعد ذلك ، استخدم ملقطا معقما لنقل كل مربع شبكي برفق مع شتلات عمرها من 10 إلى 14 يوما من طبق بتري من الوسط شبه الصلب إلى خزان أسطواني مائي. الشتلات الموضحة هنا هي البرسيم. أغلق الأغطية على الخزانات باستخدام شريط جراحي مسامي.

ثم قم بزراعة الشتلات عند 22 إلى 24 درجة مئوية مع فترة تصوير مدتها 16 ساعة واهتز عند 50 دورة في الدقيقة. قبل التلقيح ، افحص الخزان بالشتلات بعناية بحثا عن أي تلوث محتمل. يجب أن يكون الوسيط الموجود في الخزانات غير الملوثة واضحا وشفافا.

إذا كانت الخزانات غائمة بسبب التلوث ، فتخلص منها وقم بترقيم بقية الخزانات. قم بأخذ عينات من 20 ميكرولتر من الوسط المائي من كل خزان مرقم ووضعه على طبق بتري مع مرق لوريا أو أجار LB. احتضن الطبق على حرارة 28 درجة مئوية لمدة 28 ساعة.

قم على الفور بتلقيح كل خزان مائي مرقم ب 50 ميكرولتر من معلق Agrobacterium tumefacians في كل خزان مائي مرقم. قم بزراعة الشتلات وبكتيريا A. tumefacians عند 22 إلى 24 درجة مئوية مع فترة تصوير 16 ساعة واهتزاز عند 50 دورة في الدقيقة. افحص صفيحة LB المرقطة بعد 12 و 28 ساعة من الحضانة للتحقق من عقم وسط النمو المائي.

إذا كان هناك أي تلوث ، فلا تستخدم الخزان المرقم المقابل الملقح بالبكتيريا لمزيد من المقايسات النهائية.