تحضير بكتريا قولونية الكروية

0 مشاهدات4:30 د • September 26th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

خذ ثقافة الإشريكية القولونية .

قم بتخفيف المزرعة في وسائط جديدة واحتضانها لتعزيز الانقسام البكتيري.

بعد ذلك ، قم بتخفيف المزرعة في الوسائط التي تحتوي على مثبط الانقسام البكتيري واحتضانها.

تستمر البكتيريا في النمو دون انقسام ، وتشكل خيوطا ممدودة.

انقل المزرعة إلى أنبوب جديد ، ثم قم بالطرد المركزي لحبيبات الخيوط وإزالة المادة الطافية.

اغسل الحبيبات بمثبت تناضحي لمنع تحلل البلاستيدات الكروية. قم بإزالة المحلول.

أضف المخزن المؤقت والليزوزيم والحمض النووي وعامل مخلب بالتتابع. حضن.

يعمل عامل المخلب على زعزعة استقرار الغشاء الخارجي للخيوط.

يحلل الليزوزيم طبقة الببتيدوغليكان المكشوفة ، مما يتسبب في فقدان الخيوط لشكلها وتشكيل هياكل كروية تسمى البلاستيدات الكروية.

بالإضافة إلى ذلك ، يحلل DNase الحمض النووي الملوث المنبعث من الخيوط التالفة.

أضف المثبت التناضحي مرة أخرى ، واخلطه واحتضنه.

انقل المعلق إلى أنبوب يحتوي على عازل وجهاز طرد مركزي.

قم بإزالة المادة الطافية الزائدة وأعد تعليق البلاستيدات الكروية في المخزن المؤقت لتحليل المصب.

لإعداد مزرعة ليلية ، استخدم طرفا معقما من الماصة الدقيقة لنقل مستعمرة بكتيرية واحدة من صفيحة زراعة أجار صلبة إلى أنبوب زراعة 14 مل ، يحتوي على اثنين إلى ثلاثة ملليلتر من مرق الصويا من التربتيكاز بنسبة ثلاثة بالمائة ، TSB ، لمدة 16 إلى 21 ساعة عند 37 درجة مئوية مع الاهتزاز. لتحضير البلاستيدات الكروية بكتريا قولونية سالبة الجرام ، قم بتخفيف المزرعة الليلية بنسبة واحدة إلى 100 ، و 25 مل من TSB في قارورة 250 مل ، وأعد البكتيريا إلى حاضنة الاهتزاز لمدة 2.5 ساعة أخرى. عندما يصل المحلول إلى كثافة بصرية تتراوح من 0.5 إلى 0.8 عند 600 نانومتر ، قم بتخفيف المزرعة بنسبة واحد إلى عشرة في TSB الطازج في قارورة جديدة سعة 250 مليلتر للحضانة الثانية لمدة 2.5 ساعة بتركيز فعال نهائي يبلغ 60 ميكروغراما لكل مليلتر من السيفاليكسين.

لإنتاج خيوط خلية واحدة يبلغ طولها حوالي 50 إلى 150 ميكرومتر ، كما هو موضح تحت المجهر الضوئي بتكبير 1000x. قم بالطرد المركزي للمحلول البكتيري لحصاد الخيوط وصب المادة الطافية. اغسل الخيوط بإضافة لطيفة من ملليلتر واحد من 0.8 مولار سكروز ، مع الحرص على عدم إزعاج الحبيبات.

بعد دقيقة واحدة ، تخلص من المادة الطافية دون إزعاج الحبيبات ، وأضف الكواشف المشار إليها بترتيب كل منها إلى الخيوط. بعد عشر دقائق في درجة حرارة الغرفة ، أضف تدريجيا مليلترا واحدا من المحلول A على مدى دقيقة واحدة ، مع تحريك المحلول برفق باليد. احتضن المحلول لمدة أربع دقائق في درجة حرارة الغرفة، ثم قسم معلق الفتيل إلى قسمتين متساويتين بين أنبوبين مخروطيين سعة 15 ملليلتر يحتويان على سبعة ملليلتر من محلول أربع درجات مئوية B. بعد ذلك ، قم بإزالة الخيوط عن طريق الطرد المركزي ، واستخدم ماصة مصلية لإزالة جميع الملليترات من المادة الطافية بعناية باستثناء ملليلتر واحد إلى ملليلتر دون إزعاج الكريات.

استخدم ماصة دقيقة p1000 لإعادة تعليق الكريات برفق. تحقق من جزء صغير من العينة لتكوين البلاستيدات الكروية عن طريق الفحص المجهري الضوئي. يمكن بعد ذلك تخزين البلاستيدات الكروية عند 20 درجة مئوية تحت الصفر لمدة تصل إلى أسبوع أو حتى تمر بثلاث دورات تجميد للذوبان.

07:59

استخراج وتصور مجاميع البروتين بعد علاج الإشريكية القولونية مع الإجهاد البروتيوكسي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:29

تحليل السكان والخلية المفردة لاستمرار المضادات الحيوية في الإشريكية القولونية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

15:00

التحويلات اليومية وأرشفة السكان وقياس اللياقة البدنية في تجربة التطور طويلة المدى مع الإشريكية القولونية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:33

تحضير وتحويل البكتيريا باستخدام التثقيب الكهربائي عالي الجهد

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

04:02

توليد البلاستيدات النباتية من البكتيريا سالبة الجرام

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:10

بروتوكول السريع لإعداد Electrocompetent كولاي و ضمة الكوليرا

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:19

الأمر الذي أدى إلى انسداد النسخ المتماثل الموقع المحدد في E. القولونية استخدام نظام نيون كاظمة المشغل

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:28

العرض الداخلية غشاء البكتيريا لفحص مكتبة من الأجسام المضادة شظايا

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:34

امتصاص المعادن الأساسية في البكتيريا سلبية الغرام: الأشعة السينية الأسفار، النظائر المشعة، والخلية تجزئة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:46

إنتاج بروتين الايلاستين مثل الهلاميات المائية للتغليف وإيمونوستينينج من الخلايا في 3D

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 15 أغسطس 2026