تحضير بكتريا قولونية الكروية

خذ ثقافة الإشريكية القولونية .

قم بتخفيف المزرعة في وسائط جديدة واحتضانها لتعزيز الانقسام البكتيري.

بعد ذلك ، قم بتخفيف المزرعة في الوسائط التي تحتوي على مثبط الانقسام البكتيري واحتضانها.

تستمر البكتيريا في النمو دون انقسام ، وتشكل خيوطا ممدودة.

انقل المزرعة إلى أنبوب جديد ، ثم قم بالطرد المركزي لحبيبات الخيوط وإزالة المادة الطافية.

اغسل الحبيبات بمثبت تناضحي لمنع تحلل البلاستيدات الكروية. قم بإزالة المحلول.

أضف المخزن المؤقت والليزوزيم والحمض النووي وعامل مخلب بالتتابع. حضن.

يعمل عامل المخلب على زعزعة استقرار الغشاء الخارجي للخيوط.

يحلل الليزوزيم طبقة الببتيدوغليكان المكشوفة ، مما يتسبب في فقدان الخيوط لشكلها وتشكيل هياكل كروية تسمى البلاستيدات الكروية.

بالإضافة إلى ذلك ، يحلل DNase الحمض النووي الملوث المنبعث من الخيوط التالفة.

أضف المثبت التناضحي مرة أخرى ، واخلطه واحتضنه.

انقل المعلق إلى أنبوب يحتوي على عازل وجهاز طرد مركزي.

قم بإزالة المادة الطافية الزائدة وأعد تعليق البلاستيدات الكروية في المخزن المؤقت لتحليل المصب.

لإعداد مزرعة ليلية ، استخدم طرفا معقما من الماصة الدقيقة لنقل مستعمرة بكتيرية واحدة من صفيحة زراعة أجار صلبة إلى أنبوب زراعة 14 مل ، يحتوي على اثنين إلى ثلاثة ملليلتر من مرق الصويا من التربتيكاز بنسبة ثلاثة بالمائة ، TSB ، لمدة 16 إلى 21 ساعة عند 37 درجة مئوية مع الاهتزاز. لتح