موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 3:13 دقيقة • September 26th, 2025
خذ ثقافة Bacillus megaterium ، وهي بكتيريا موجبة الجرام.
قم بتخفيف المزرعة في وسائط جديدة واحتضانها بالرج لتعزيز الانقسام البكتيري.
انقل المزرعة إلى أنبوب وجهاز طرد مركزي لحبيبات البكتيريا.
قم بإزالة المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات في وسائط تحتوي على مثبتات تناضحية لمنع تحلل البروتوبلاست.
انقل المحلول المعلق إلى قارورة ، وأضف الليزوزيم ، واحتضنه مع الرج.
أثناء الحضانة ، يحلل الليزوزيم جدار خلية الببتيدوغليكان السميك للبكتيريا.
عندما يتحلل جدار الخلية ، تتغير البكتيريا من شكل قضيب إلى أجسام كروية يحدها غشاء البلازما فقط ، وتشكل البروتوبلاستات.
تصور التعليق تحت المجهر.
تؤكد البكتيريا المستديرة الشكل تكوين البروتوبلاست ، بينما تشير البكتيريا المنتفخة على شكل قضيب إلى عدم اكتمال الهضم.
انقل المحلول إلى أنبوب وجهاز طرد مركزي لحبيبات البروتوبلاستات.
قم بإزالة المادة الطافية وأعد تعليق البروتوبلاستات في وسائط جديدة تحتوي على مثبتات تناضحية لمزيد من التحليل.
لتحضير بروتوبلاست B. megaterium موجبة الجرام ، قم بتخفيف المزرعة البكتيرية بين عشية وضحاها بنسبة واحد إلى 1000 في 100 مل من ثلاثة بالمائة TSB في قارورة 250 مل لمدة 4.5 ساعة عند 37 درجة مئوية مع الاهتزاز. عندما تصل المزرعة السائلة إلى كثافة بصرية تتراوح من 0.9 إلى 1.0 عند 600 نانومتر ، قم بتقسيم البكتيريا بين أنبوبين مخروطيين سعة 50 ملليلتر للطرد المركزي ، واستخدم ماصة سيرولوجية لشفط المواد الطافية. أعد تعليق الكريات في 2.5 مل من وسط البروتوبلاست لكل أنبوب ، واسحب التعليق إلى أنبوب مخروطي واحد للثقافة في قارورة 125 مل.
أضف مليلتر واحد من خمسة ملليغرام لكل مليلتر من الليزوزيم إلى المزرعة لمدة ساعة حضانة عند 37 درجة مئوية مع الرج. مراقبة نمو البروتوبلاست تحت المجهر الضوئي وملاحظة أي مخالفات ، مثل البكتيريا التي تظهر على شكل قضبان منتفخة بدلا من الكرات. في نهاية الحضانة ، انقل التعليق إلى أنبوب مخروطي 15 مل للطرد المركزي ، وأعد تعليق الحبيبات في خمسة ملليلتر من وسط البروتوبلاست.
يمكن بعد ذلك تخزين البروتوبلاست عند 20 درجة مئوية تحت الصفر لمدة تصل إلى أسبوع أو حتى يمروا بثلاث دورات تجميد ذوبان.