JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 3:03 د • September 26th, 2025
ابدأ بمزارع السلالات البرية والطافرة من Streptomyces coelicolor ، وهي بكتيريا تربة خيطية.
تحمل السلالات الطافرة طفرات في الجينات التنموية التي تسبب اختلافات مظهرية عن النوع البري.
إعادة زراعة المستعمرات على أطباق جديدة لتقليل تراكم الطفرات العفوية مع تقدم العمر.
قم بوضع مستعمرات مفردة من السلالات على مناطق منفصلة من الصفيحة بنمط إسفين لتجنب التلوث المتبادل
احتضان اللوحة لتعزيز نمو البكتيريا.
تشكل السلالات البرية خيوطا هوائية تتطور إلى سلاسل طويلة من الجراثيم ذات اللون الرمادي ، مما يمنح المستعمرات مظهرا غامضا.
في المقابل ، تفشل السلالات الطافرة إما في تطوير خيوط هوائية ، مما يؤدي إلى ظهور أصلع ، أو تنتج عددا أقل من الجراثيم المصطبغة ، مما يتسبب في ظهور الخيوط الهوائية بيضاء.
ضع طبق بتري على خلفية موحدة لتصور مورفولوجيا المستعمرة.
التقط صورا لمقارنة الاختلافات المظهرية بصريا بين السلالات البرية والمتحولة.
استخدم طريقة قياسية ، مثل طريقة الخط الرباعي الموضحة في سوندرز 2012 لخط سلالات Streptomyces على ألواح أجار MS والثقافة في مستعمرات مفردة.
كل أربعة إلى ستة أيام ، اختر مستعمرة واحدة وأعد وضعها على طبق جديد. مع تقدم المستعمرات في العمر ، تصبح عرضة للطفرات العشوائية. بعد إجراء الطفرات وفقا لبروتوكول النص ، لاحظ مورفولوجيا المستعمرة لكل متحولة مقارنة بالسلالة الأم من النوع البري.
عند توصيف أنواع Streptomyces الجديدة ، قارن العزلة الجديدة بتلك الخاصة بالأنواع المدروسة جيدا مع ملاحظة الشكل الأساسي وسطح المستعمرة والتعتيم والارتفاع والتصبغ. قم بتسمية لوحة أجار MS وسلالات من النوع البري والطافرة في أنماط إسفين. احرص على عدم لمس أي سلالة سلالة أخرى لتجنب انتقال التلوث.
لاحظ تاريخ ووقت خطوط السلالات على اللوحة. ثم احتضن الألواح على حرارة 30 درجة مئوية. تذكر أنه من المهم للغاية حماية عينة Streptomyces الخاصة بك دائما من التلوث ، واستخدام أفضل تقنية معقمة لجميع خطوات فتح الألواح والأنابيب لأقل وقت ممكن.
ضع أطباق بتري المزروعة على ورق ملون أو أبيض لتجانس الخلفية. اكتب على الورق اسم السلالة والتاريخ ودرجة حرارة الحضانة والوقت من خطوط اللوحة الأولى.
التقط صورا رقمية للوحة مع كتابة معلومات الإجهاد على خلفية الورق بحيث يكون الارتباك ضئيلا.