الفحص المجهري لتباين الطور لتقييم الطفرات التنموية في Streptomyces

ابدأ بألواح أجار تحتوي على مستعمرات من سلالات من النوع البري والطافرة من Streptomyces coelicolor ، وهي بكتيريا تربة خيطية.

ضع غطاء معقما فوق منطقة من نمو المستعمرة الكثيفة حيث تكون الخيوط الهوائية ، وهي خيوط تمتد فوق سطح المستعمرة ، مرئية بوضوح.

اضغط برفق على غطاء الغطاء لنقل الخيوط الهوائية والجراثيم المرتبطة بها إلى سطح الغطاء.

بعد ذلك ، خذ شريحة مجهر مع وسائط التثبيت وقم بتركيب جانب الخلية لأسفل للحفاظ على الهياكل البكتيرية.

ضع الشريحة على مرحلة المجهر ، وأضف قطرة من زيت الغمر على الغطاء ، وقم بمحاذاة الهدف.

باستخدام الفحص المجهري لتباين الطور ، احصل على صور للخيوط الهوائية من كل من السلالات البرية والمتحولة.

تظهر الخيوط من النوع البري جراثيم ذات حجم موحد ومتباعدة بانتظام.

في المقابل ، تظهر السلالات الطافرة عيوبا ، مثل الخيوط المنتفخة أو الجراثيم غير المنتظمة أو الجراثيم المتحللة ، مما يكشف عن اختلافات النمط الظاهري التنموي بين النوع البري والطفرات.

لتحضير رفع غطاء لنمو البكتيريا ، استخدم ملاقط معقمة لالتقاط غطاء معقم ووضع الغطاء على صفيحة أجار MS حيث يكون نمو البكتيريا كثيفا. باستخدام الملقط ، اضغط برفق على الجزء الخلفي من الغطاء لضمان نقل كاف للجراثيم البكتيرية والفطريات الهوائية. التقط الغطاء من اللوحة وضعه بزاوية 45 درجة بحيث تواجه مادة الخلية سطح شريحة مجهر تحتوي على قطرة 15 ميكرولتر من 50٪ جلسرين.

اترك الغطاء يسقط على الجلسرين مما يقلل من فقاعات الهواء. لإجراء الفحص المجهري لتباين الطور على فترات زمنية مختلفة ، ضع الشريحة المحضرة على مرحلة المجهر وأضف قطرة من زيت الغمر إلى وسط الغطاء. قم بتدوير هدف الطور 100x في مكانه واضبط برج المكثف على إعداد مرحلة المطابقة المناسبة.

بمجرد ملامسة العدسة الشيئية للزيت ، استخدم فقط مقبض الضبط الدقيق لتركيز الصورة. افحص العديد من مجالات الرؤية لتمييز الاختلافات الملحوظة والمتسقة بين السلالات الطافرة والنوع البري. مثل القدرة على تكوين الجراثيم وحجم وشكل الأبواغ والعدد الإجمالي للجراثيم.