موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:35 دقيقة • September 26th, 2025
ابدأ بشريحة زجاجية ذات حجرة مطلية بغشاء مدعوم يتكون من الدهون الفوسفورية ، بما في ذلك الدهون الفوسفورية البيوتينيلة.
احتضان بالنيوترافيدين ، الذي يرتبط بالبيوتين على الطبقة الثنائية. يغسل لإزالة النيوترافيدين الزائد.
أدخل وسيطا غذائيا يحتوي على حويصلات عملاقة أو GVs. كل GV عبارة عن حويصلة ثنائية الطبقة دهنية كروية بحجم ميكرون تغلف خلية بكتيرية واحدة ، وتعمل كنموذج لدراسة سلوك الخلية الفردية في بيئة محصورة.
يرتبط نيوترافيدين بدهون GV البيوتينيل ، مما يثبت الحويصلات في الغشاء المدعوم لمراقبة مستقرة وطويلة الأمد في ظل ظروف ثابتة.
أغلق الغرفة للحفاظ على الترطيب وتقليل التلوث.
ضع الشريحة على مرحلة مجهر مزودة بمنصة تسخين لمحاكاة الظروف الفسيولوجية والمراقبة تحت المجهر.
تنتشر العناصر الغذائية من الوسط في GV لدعم نمو البكتيريا بمرور الوقت.
يسمح هذا الإعداد بالتصور في الوقت الفعلي لنمو البكتيريا أحادية الخلية داخل البيئات الدقيقة الحويصلة المحصورة.
لتثبيت الحويصلات العملاقة على الغشاء ثنائي الطبقة الداعم ، أدخل 10 ميكرولتر من النيوترافيدين في محلول حويصلي عملاق مائي خارجي إلى الحفرة لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
في نهاية الحضانة ، اغسل الفتحة برفق مرتين ب 20 ميكرولتر من وسط LB ، مع استكمال 200 ملليمولار من الجلوكوز ، وأضف الحجم الكامل لمحلول الحويصلة العملاقة إلى الفتحة الموجودة في الغرفة. ثم أغلق الفتحة بغطاء زجاجي مقاس 18 × 18 ملم. لمراقبة نمو البكتيريا داخل الحويصلات العملاقة ، حدد هدف 40X على مجهر مقلوب ، وضع الغرفة على نظام مرحلة تسخين المجهر.
ثم احتضان الحويصلات العملاقة المحتوية على الخلايا البكتيرية في الغرفة في ظل ظروف ثابتة لمدة ست ساعات عند 37 درجة مئوية ، والتقاط وتسجيل صور لنمو الخلايا البكتيرية كل 30 دقيقة ، باستخدام كاميرا أشباه الموصلات التكميلية العلمية لأكسيد المعادن.