عزل البكتيريا سالبة الجرام مع إدخالات الينقولات الجينومية

ابدأ بإذابة مزرعة مجمدة للمتبرع المتزاوج والمتلقي البكتيريا سالبة الجرام على الجليد.

تحمل الخلايا المتلقية الينقولات ، وهي أجزاء قصيرة من الحمض النووي تتضمن جين مقاومة للمضاد الحيوي كانامايسين. يتم دمج هذه الينقولات بشكل عشوائي في جينوم المضيف.

أضف المزرعة إلى طبق أجار غني بالمغذيات يحتوي على كانامايسين ولكن بدون مغذيات خاصة بالمانحين.

أضف حبات معقمة وقم بتدوير اللوحة برفق لنشر الثقافة بشكل موحد.

قم بإزالة الخرز واحتضانها. تستخدم البكتيريا المتلقية العناصر الغذائية ، ولكن فقط تلك التي تحتوي على ينقولات متكاملة تقاوم الكانامايسين ، مما يؤدي إلى تكوين المستعمرة.

تفشل البكتيريا المانحة والمتلقية بدون ينقولات في النمو.

عد الوحدات المكونة للمستعمرة لتقدير عدد البكتيريا المتلقية مع إدخالات الينقولات الفريدة.

أضف وسائط جديدة واجمع البكتيريا.

جهاز طرد مركزي لحبيبات البكتيريا والتخلص من المادة الطافية.

أعد تعليق الحبيبات في الوسائط باستخدام واقي من التبريد للحفاظ على بقاء البكتيريا.

قم بإذابة جزء من التزاوج المجمد على الجليد. بعد ذلك ، استخدم حبات زجاجية معقمة لنشر 150 ميكرولتر من التخفيف ، على كل صفيحة أجار Luria-Bertani مقاس 30 × 150 ملم ، مع استكمالها بالكاناميسين.

تخلص من الأنبوب المستخدم الذي يحتوي على التزاوج الزائد ، واحتضن الألواح على حرارة 37 درجة مئوية لمدة 14 ساعة. بعد الحضانة ، قم بحساب وح