امتصاص الحمض النووي الناجم عن الكفاءة في المكورات العنقودية الذهبية

خذ مزرعة المكورات العنقودية الذهبية الحساسة للمضادات الحيوية كلورامفينيكول.

جهاز طرد مركزي لإزالة البكتيريا وإزالة المادة الطافية.

انقل الحبيبات إلى أنبوب يحتوي على وسائط تحد من المغذيات واحتضانها. يعزز الإجهاد الغذائي الكفاءة - قدرة البكتيريا على استيعاب الحمض النووي الأجنبي.

قم بالطرد المركزي مرة أخرى وإزالة المادة الطافية. أعد تعليق الحبيبات في وسائط جديدة تحد من العناصر الغذائية.

بعد ذلك ، أضف الحمض النووي المستخرج من S. aureus سلالة تحمل جينا مقاوما للكلورامفينيكول. حضن.

تقوم آلية امتصاص الحمض النووي بمعالجة الحمض النووي إلى خيط واحد ونقله إلى السيتوبلازم ، حيث يندمج في الكروموسوم البكتيري.

جهاز طرد مركزي وإزالة المادة الطافية. أعد تعليق الحبيبات في وسائط غنية بالمغذيات.

انقل المعلق إلى أجار غني بالمغذيات المنصهرة يحتوي على الكلورامفينيكول.

يسكب المزيج في طبق ويحتضن.

يشير نمو المستعمرات المقاومة للكلورامفينيكول إلى امتصاص الحمض النووي بنجاح.

قم بزراعة الخلية المتلقية بين عشية وضحاها ، في خمسة ملليلتر من TSB عند 37 درجة مئوية مع الاهتزاز. في صباح اليوم التالي ، انقل 0.5 مل من المزرعة الليلية إلى أنبوب 1.5 ملليلتر.

ترسب الخلايا عن طريق الطرد المركزي. ثم الخلايا ب 10 ملليلتر من CS2 وسط في أنبوب 50 مل. بعد ذلك ، قم بزراعة البكتيريا عند 37 درجة مئوية مع الاهتزاز عند 180 دورة في الدقيقة لمدة ثماني ساعات حتى المرحلة الأسية المتأخرة.

حصاد الخلايا عن طريق الطرد المركزي. تخلص من المادة الطافية ، وأعد تعليق الخلايا في 10 ملليلتر من وسط CS2 الطازج. أضف 10 ميكروغرام من البلازميد المنقى أو الحمض النووي الجيني إلى معلق الخلية.

رج المزرعة بمعدل 180 دورة في الدقيقة. ثم اجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي. أعد تعليق الخلايا في 10 ملليلتر من وسط BHI.

امزج معلق الخلية مع 90 مل من مكمل BHI agar المذاب مع 32 ملليغرام لكل لتر من الكلورامفينيكول ، وخمسة ميكروغرام لكل لتر من التتراسيكلين في تجربة التحكم. يسكب المزيج في أطباق بتري مقاس 90 ملم ويبرد بسرعة ويترك الأجار يتماسك. قم بتكرار المستعمرات باستخدام أعواد الأسنان إلى أطباق تحتوي على مضادات حيوية مناسبة لتأكيد خصائص مقاومتها.