اختبار سائل متعدد الآبار لفحص C. ايليجانس الضربة القاضية
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:35 دقيقة • September 26th, 2025
خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على وسائط أجار مرقطة مسبقا ببكتيريا RNAi ، مع أو بدون ملحق خاص بالجين يستهدف C. ايليجانس .
قامت البذور بمزامنة الديدان من المرحلة L1 في الآبار واحتضانها للسماح بالتغذية على بكتيريا RNAi.
ينتج الإدخال الحمض النووي الريبي المتداخل الذي يستهدف جينات دودة معينة ، مما يولد نمطا ظاهريا للضربة القاضية الخاصة بالجينات.
أضف عازلة إلى الآبار وأعد تعليق الديدان برفق.
انقل المعلق إلى صفيحة عميقة واترك الديدان تستقر عن طريق الجاذبية.
قم بإزالة المادة الطافية ، مع الاحتفاظ ببعض المخزن المؤقت.
اغسل الديدان بالمخزن المؤقت ، ثم تخلص من المادة الطافية ، واترك كمية صغيرة من المخزن المؤقت.
بعد ذلك ، خذ لوحة فحص متعددة الآبار تحتوي على بكتيريا مسببة للأمراض.
قم بتوزيع عدد محدد من الديدان المضادة والضربة القاضية في الآبار الخاصة بها لتمكين تفاعلات المضيف والممرض. تفرز البكتيريا المسببة للأمراض المركبات التي تحفز وفيات الديدان.
قارن معدل وفيات الديدان لتقييم تأثير الضربة القاضية الخاصة بالجينات على بقاء الديدان.
أضف مليلترا واحدا من S Basal لكل بئر من صفيحة 24 بئرا تحتوي على 300 دودة لكل بئر. قم بتحريك الديدان برفق عن طريق هز اللوحة ، ثم انقل الديدان إلى صفيحة فارغة ومعقمة بعمق 24 بئرا.
اترك الديدان تستقر بالجاذبية ، حوالي خمس دقائق. استنشق المادة الطافية ، واترك ما يقرب من ملليلتر واحد
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية