الكشف اللوني عن تدهور القشرة أثناء إنبات الأبواغ البكتيرية

تظل البوغ البكتيري نائمة بسبب طبقة قشرة الببتيدوغليكان ، وهي بوليمر من السكريات والأحماض الأمينية.

أثناء الإنبات ، تتحلل القشرة لإطلاق السكريات في الوسط المحيط.

للكشف عن تدهور القشرة ، ابدأ بالوسط الذي يحتوي على السكريات المنبعثة ، والتي تم جمعها في نقاط زمنية محددة أثناء إنبات الأبواغ.

استخدم تركيزات متزايدة من معايير السكر كمرجع.

خضعت المعايير والعينات لمعالجة مسبقة لتحويل السكريات إلى شكل تفاعلي.

احتضان بكاشف إيرليش ، وهو كاشف للكشف عن الألوان يتفاعل مع السكريات ويشكل مركبا أرجوانيا اللون.

انقل المخاليط إلى صفيحة متعددة الآبار وقم بقياس امتصاص المجمعات الملونة باستخدام قارئ microplate.

يتوافق الامتصاص مع شدة اللون الأرجواني ، والتي تتناسب طرديا مع تركيز السكر.

تشير الزيادة في الامتصاص عبر عينات النقطة الزمنية إلى تدهور القشرة التدريجي.

قم بإنشاء رسم بياني من التركيزات القياسية وتحديد تركيزات العينة.

أثناء وجود العينات على الجليد ، قم بإعداد كاشف اللون. قم بإذابة 0.320 جرام من DMAB في 1.9 مل من حمض الخليك الجليدي. لاحظ أن هذا الكاشف حساس للوقت ودرجة الحرارة والضوء ولا ينبغي إجراؤه مسبقا.

بعد أن يذوب DMAB تماما ، أضف 100 ميكرولتر من 10 حمض الهيدروكلوريك العادي وقم بدوامة العينة. ثم أضف خمسة ملليلتر من حمض الخليك الجليدي والدوامة مرة أخرى. بالنسبة للتفاعل اللوني ، انقل 100 ميكرولتر من كل قشرة مبردة أو عينة تحكم إلى أنبوب طرد مركزي دقيق جديد بسعة 1.5 ملليلتر.

أضف 700 ميكرولتر من محلول الألوان المحضر حديثا إلى كل عينة. انقل العينات على الفور إلى حمام مائي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية واحتضن العينات لمدة 20 دقيقة بالضبط. بعد الحضانة ، انقل 200 ميكرولتر من كل عينة إلى صفيحة شفافة مكونة من 96 بئرا.

يجب أن تكون العينات صفراء اللون في البداية ولكنها ستتحول إلى اللون الأرجواني في حالة وجود نسبة السكر المختزلة ، مما يشير إلى وجود القشرة. هنا ، لا تظهر العديد من العينات لونا أرجوانيا مرئيا. ومع ذلك ، فإن عينات 250 و 500 و 500 نانو مول تبدو مختلفة بصريا عن التحكم السلبي صفر نانومول.

باستخدام قارئ الألواح ، حدد الامتصاص عند 585 نانومتر. عند القياس في OD يبلغ 585 نانومتر ، فإن الإشارة المتولدة من العينات القياسية تناسب الانحدار الخطي بشكل أفضل.