موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:50 دقيقة • September 26th, 2025
ابدأ بثقافة الأنواع البكتيرية التي تشفر البروتينات المؤتلفة الموسومة بببتيد الحويصلة ، أو VNp ، وهو ببتيد قصير يعزز تكوين الحويصلة.
أضف محفزا إلى المزرعة واحتضنها. يحفز المحفز تعبير البروتين.
يدمج VNp في الغشاء الداخلي ويعزز انحناء الغشاء ، ويغلف البروتينات الموسومة ب VNp في حويصلات ناشئة.
انقل الوسط الغني بالحويصلات إلى أنبوب. قم بالطرد المركزي لفصل المادة الطافية الغنية بالحويصلات.
بعد ذلك ، قم بتصفية المادة الطافية لإزالة الملوثات المتبقية.
بعد ذلك ، قم بتمرير المرشح عبر مرشح غشائي آخر لالتقاط الحويصلات على سطح الغشاء.
ضع الغشاء في طبق وأضف المحلول الملحي المخزن بالفوسفات.
افصل الحويصلات برفق وانقل المعلق إلى أنبوب نظيف.
صوتنة المعلق لتعطيل أغشية الحويصلة وإطلاق البروتينات.
جهاز طرد مركزي للمحللة لفصل شظايا الغشاء.
يحتوي المادة الطافية الناتجة على بروتينات مؤتلفة نقية وجاهزة للتحليل.
تحفيز تعبير البروتين المؤتلف من محفز T7 عن طريق إضافة IPTG إلى تركيز نهائي يصل إلى 20 ميكروغراما لكل مليلتر ، أو 84 ميكرومولار. بعد إتاحة وقت كاف للتحريض ، قم بإزالة الخلايا عن طريق الطرد المركزي عند 3000 جم و 4 درجات مئوية لمدة 20 دقيقة. قم بتمرير المادة الطافية من خلال مرشح PES معقم وخالي من المنظفات سعة 0.45 ميكرون لتعقيم الوسائط المحتوية على الحويصلة للتخزين طويل الأجل.
لتركيز الحويصلات في حجم أصغر ، قم بتم
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية