موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:19 دقيقة • September 26th, 2025
خذ المحاقن التي تحتوي على شرائط بوليمرية خالية من المضادات الحيوية ومحملة بالمضادات الحيوية.
املأ المحاقن بثقافة نشطة أيضيا للبكتيريا المسببة للأمراض.
احتضان المحاقن بالرج لضمان التعرض البكتيري المنتظم للوسط.
أثناء الحضانة ، تنتشر المضادات الحيوية من الشريط المحمل في الوسائط وتمنع نمو البكتيريا.
في المحقنة مع الشريط الخالي من المضادات الحيوية ، تتكاثر البكتيريا.
اجمع المعلق البكتيري من كل حقنة في أنابيب الطرد المركزي الدقيقة.
انقل الاقتباسات إلى طبق متعدد الآبار.
أضف خليط كاشف يحتوي على لوسيفيرين وإنزيم لوسيفيراز وعامل تحلل.
احتضان مع الاهتزاز لتمكين التحلل البكتيري ، الذي يطلق المكونات الخلوية ، بما في ذلك ATP. يقود ATP تفاعل الإنارة بوساطة لوسيفيراز.
باستخدام قارئ microplate ، قم بتسجيل التلألؤ.
تظهر الثقافة البكتيرية المعرضة للشريط المحمل بالمضادات الحيوية تلألؤ أقل مقارنة بالثقافة غير المعرضة للمضادات الحيوية.
يؤكد هذا التلألؤ المنخفض الفعالية المضادة للبكتيريا للشريط المحمل بالمضادات الحيوية.
ضع شرائط UHMWPE البكر والمحملة بالمخدرات داخل حقنة سعة ثلاثة ملليلتر. ثم اسحب معلقا بكتيري يحتوي على MHB في المحقنة من خلال الإبرة المرفقة حتى علامة 1.5 ملليلتر.
ضع إعداد المحقنة على حاضنة اهتزاز حتى النقاط الزمنية المحددة لمدة ست ساعات ، ثم كل يوم حتى اليوم السابع. بعد كل نقطة زمنية محددة ، أخرج إعداد المحقنة ووزع الوسائط في أنبوب سعة ملليلتر. قم بإجراء فحص الجدوى الميكروبية في الوقت الفعلي كما هو موضح في المخطوطة باستخدام 100 ميكرولتر من المعلق البكتيري.