JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 1:28 د • October 30th, 2025
خذ مزرعة من Corynebacterium glutamicum ، المحولة باستخدام بلازميد يحمل جين مراسل الفلورسنت في اتجاه مجرى النهر من الحمض النووي الريبي المضاد للإنهاء أو تسلسل RAT ، في صفيحة متعددة الآبار.
أثناء النسخ ، يشكل RAT-RNA بنية حلقة جذعية تمنع بوليميراز الحمض النووي الريبي ، مما يوقف التعبير الجيني للمراسل.
يعبر البلازميد أيضا بشكل أساسي عن LicV ، وهو بروتين اندماج يشتمل على بروتين ربط RAT-RNA ، LicT ، ومجال VVD الحساس للضوء الأزرق.
في الظلام ، يظل LicV أحادي اللون ولا يرتبط بالحلقة الجذعية RAT-RNA ، والتي تمنع نسخ جين المراسل.
قم بإضاءة المزرعة بالضوء الأزرق لإحداث تغيير توافقي في مجال VVD ، مما يؤدي إلى تثنية LicV.
يرتبط LicV الثنائي ب RAT-RNA ، مما يكشف عن بنية الحلقة الجذعية ويسمح لبوليميراز الحمض النووي الريبي بنسخ جين المراسل ، مما ينتج عنه بروتين المراسل الفلوري.
راقب الثقافة تحت مجهر الفلورة.
يؤكد التألق القوي للمراسل بعد إضاءة الضوء الأزرق والحد الأدنى من التألق في الظلام التحكم البصري الوراثي الناجح.