الزخرفة الدقيقة والتتبع القائم على التألق لنمو البكتيريا أحادية الخلية

ابدأ بمزرعة بكتيرية تحمل علامات فلورية تضاف إلى مخزن مؤقت خال من الكربون.

جهاز طرد مركزي لحبيبات البكتيريا والتخلص من المادة الطافية.

أعد تعليق الحبيبات في مخزن مؤقت جديد خال من الكربون يحتوي على منظف معتدل.

يؤدي عدم وجود مصدر كربون إلى إيقاف النمو ، بينما يمنع المنظف التكتل ويحافظ على الخلايا معلقة.

قم بتحميل المعلق البكتيري في حقنة وقم بتوصيله بمضخة.

قم بحقن المعلق في مدخل شريحة الموائع الدقيقة التي تحتوي على قناة بها مصائد مدمجة في الأرضية.

اسحب السائل ببطء من مخرج القناة.

عندما ينحسر السائل ، توجه القوى الشعرية البكتيريا نحو المخرج.

في هذه العملية ، تستقر الخلايا البكتيرية المفردة في الفخاخ ، مما يؤدي إلى الزخرفة البكتيرية.

اغسل القناة بمرق دافئ مسبقا وغني بالمغذيات باستمرار.

تستأنف البكتيريا النمو وتشكل مستعمرات دقيقة داخل الفخاخ.

استخدم الفحص المجهري الفلوري لالتقاط صور بفاصل زمني وتحليل نمو البكتيريا في بيئة خاضعة للرقابة.

قم بإخراج ملليلتر واحد من وسط MOPS في قارورة طرد مركزي وأضف 10 ميكرولتر من فوسفات البوتاسيوم 0.132 مولار.

[أليكوت] 100 ميكرولتر من الثقافة بين عشية وضحاها في ال [أتريفوغ] قارورة وطرد مركزي الثقافة في 2,300 أوقات [غ] [غ] [ل ثنتين] دقيقة. تخلص من المادة الطافية برفق لإعادة تعليق الحبيبات في مليلتر واحد من وسط MOPS الطازج مع 0.015٪ من Tween 20 و 0.01٪ من فوسفات البوتاسيوم وقم بتحميل المعلق البكتيري في حقنة سعة ملليلتر واحد. لتأمين المحقنة ووصلة الأنبوب ، أدخل إبرة مباشرة في الأنبوب.

الآن قم بتركيب المحقنة على مضخة الحقنة وحقن المعلق في رقاقة الموائع الدقيقة من خلال المدخل الموجود في الجزء العلوي من القناة حتى يغطي التعليق منطقة القالب بمصائد. اضبط مضخة المحقنة على معدل تدفق من 0.07 إلى 0.2 ميكرولتر في الدقيقة لسحب المعلق البكتيري ومراقبة عملية الزخرفة عبر برنامج المجهر. بمجرد أن يتم تصميم القالب بالخلايا ، قم بزيادة معدل تدفق السحب لتفريغ قناة الموائع الدقيقة بسرعة وشطفها ب LB جديد تم تفريغه مسبقا لمدة 30 دقيقة على الأقل وتم تسخينه مسبقا عند 30 درجة مئوية.

الآن اضبط مضخة المحقنة على معدل تدفق يبلغ ميكرولتر في الدقيقة لغسل القناة برفق. بمجرد ملء القناة ، قم بزيادة معدل التدفق مرة أخرى. احصل على صور للبكتيريا النامية عند التكبير المطلوب والفاصل الزمني المطلوب.