JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 2:15 د • October 30th, 2025
خذ شريحة تحتوي على جراثيم بكتيرية خاملة وكريات مجهرية فلورية كمرجع.
تحمل الجراثيم مراسلين فلوريين أحمر وأخضر لبروتينات الإنبات ، مع تلطيخ الغشاء الداخلي باستخدام صبغة محبة للدهون.
قم بتركيب الشريحة على مجهر إضاءة منظم أو بطاقة SIM مزودة بهدف غمر الزيت.
حدد موقع الكريات المجهرية الفلورية واضبط التركيز لتقليل ضبابية الصورة.
بعد ذلك ، استخدم الضوء المنقول لتحديد موقع الجراثيم البكتيرية.
قم بالتبديل إلى وضع SIM وقم بإضاءة الجراثيم لإثارة الفلوروفورات.
احصل على صور مضانة عالية الدقة عبر عمق البوغ.
على الغشاء الداخلي الملطخ بالصبغة المحبة للدهون ، تظهر بروتينات الإنبات كبؤر حمراء وخضراء مميزة. يتيح ذلك رسم خرائط دقيقة لموقع بروتينات الإنبات داخل الجراثيم البكتيرية.
لتصوير العينات ، ضع الشريحة على مجهر إضاءة منظم مزود بهدف زيت 100X ، وركز على الكريات المجهرية الفلورية 100 نانومتر.
اضبط حلقة التصحيح على هدف 100X حتى يتم الحصول على وظيفة انتشار نقطة متماثلة لتقليل ضبابية الصور ، وحدد مجال رؤية مع حوالي 10 كريات مجهرية فلورية مستديرة. قم بتطبيق ضبط تركيز صريف للأطوال الموجية المخصصة للإثارة ، في هذه الحالة ، 561 و 488 نانومتر ، كدليل لبرنامج تحليل الصور قبل التركيز على الجراثيم مع ضوء الإرسال. التقط صورة ضوء الإرسال في وضع متوسط 16X مع تعريض ضوئي يبلغ 20 مللي ثانية لكل صورة.
بعد ذلك ، التقط صورا فلورية أولية لمجهر الإضاءة ثلاثي الأبعاد للجراثيم باستخدام وضع إضاءة 3D-SIM.