$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
خذ محللة بكتيرية تحتوي على بروتينات محبة للماء وبروتينات دهنية ومجاميع بروتينية.
أضف منظفا باردا غير أيوني قادر على فصل الطور في درجات حرارة أكثر دفئا.
احتضن على الثلج واخلطه بشكل دوري. يرتبط المنظف بجزء الدهون في البروتين الدهني ، مكونا مجمعات منظفات البروتين.
قم بتسخين الخليط للحث على فصل الطور. تتركز البروتينات الدهنية في مرحلة المنظفات ، بينما تبقى البروتينات المحبة للماء في المرحلة المائية.
جهاز طرد مركزي في درجة حرارة الغرفة للحفاظ على الفصل ثنائي الطور.
تخلص من المرحلة المائية ، وأضف عازلة باردة إلى مرحلة المنظف ، واخلطها.
كرر دورة التبريد والتدفئة والطرد المركزي لإثراء البروتينات الدهنية.
ثم أضف المخزن المؤقت البارد وجهاز الطرد المركزي على درجة حرارة منخفضة لتكوير المجاميع غير البروتين الدهني.
انقل المادة الطافية إلى أنبوب يحتوي على مذيب مرسب للبروتين واحتضان عند درجة حرارة دون الصفر لترسيب البروتينات الدهنية.
قم بالطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة وتخلص من المادة الطافية.
البروتينات الدهنية المترسبة جاهزة للدراسات النهائية.
استكمل المادة الطافية بالمادة الخافضة للتوتر السطحي TX-114 بتركيز نهائي قدره 2٪ عن طريق إضافة حجم متساو من 4٪ من الفاعل بالسطح في TBSE البارد. احتضن المادة الطافية المكملة على الثلج لمدة ساعة واحدة ، واخلطها عن طريق الانعكاس كل 15 دقيقة. انقل الأنبوب إلى حمام مائي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية ، واحتضن لمدة 10 دقائق للحث على فصل الطور.
قم بالطرد المركزي للعينة عند 10,000 مرة جم لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة للحفاظ على الفصل ثنائي الطور. قم بإزالة الماصة برفق من المرحلة المائية العلوية وتخلص منها. أضف TBSE المثلج إلى المرحلة السفلية للتوتر السطحي لإعادة ملء الأنبوب إلى حجمه الأصلي وقلبه للخلط.
احتضن على الثلج لمدة 10 دقائق. بعد الحضانة ، انقل الأنبوب إلى حمام مائي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية واحتضنه لمدة 10 دقائق للحث على فصل الطور ، ثم جهاز الطرد المركزي عند 10,000 مرة جم لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد تكرار هذه الخطوات مرة أخرى لما مجموعه ثلاث فواصل ، قم بإزالة المرحلة المائية العلوية وتخلص منها.
قم بإزالة حبيبات البروتينات المترسبة التي تشكلت أثناء عمليات الاستخراج عن طريق إضافة حجم واحد من TBSE البارد المثلج إلى مرحلة الفاعل بالسطح. جهاز طرد مركزي عند أربع درجات مئوية و 16,000 مرة جم لمدة دقيقتين لحبيبات البروتين غير القابل للذوبان. انقل المادة الطافية على الفور إلى أنبوب طرد مركزي دقيق جديد سعة 2.0 مل يحتوي على 1,250 ميكرولتر من الأسيتون بنسبة 100٪.
امزج العينة عن طريق الانعكاس واحتضنها طوال الليل عند 20 درجة مئوية تحت الصفر لترسيب البروتين. في اليوم التالي ، قم بالطرد المركزي للعينة عند 16,000 مرة جم لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة لتكوير البروتينات الدهنية مع الانتباه إلى اتجاه الأنبوب. اغسل الحبيبات مرتين باستخدام الأسيتون بنسبة 100٪ قبل صب الأسيتون والسماح للعينة بالجفاف في الهواء.
بعد ذلك ، أضف 20 إلى 40 ميكرولتر من Tris-HCL 10 ملليمولار ، درجة الحموضة 8.0 ، وأعد تعليق الحبيبات تماما عن طريق سحب العينة لأعلى ولأسفل على الحائط باستخدام البروتينات الدهنية المترسبة.