تنقية بروتينات المجال P المؤتلف المشتقة من البكتيريا من نوروفيروس بشري

خذ عمود كروماتوغرافيا لاستبعاد الحجم مليئا بخرز جل كروي مسامي.

قم بموازنة العمود باستخدام مخزن مؤقت يحافظ على السلامة الهيكلية للبروتينات أثناء الفصل.

قم بتحميل مستخلص بكتيري منقى يحتوي على بروتينات مجال نوروفيروس بشري P المعبر عنها مؤتلفا وشوائب البروتين المتبقية.

أضف المخزن المؤقت لدفع العينة عبر العمود.

لا يمكن للشوائب الكبيرة المتبقية أن تدخل المسام وتمر عبر الفراغات بين الخرز ، وتتسرب أولا.

مراقبة الشطف باستخدام امتصاص الأشعة فوق البنفسجية. تشير الذروة الصغيرة إلى خروج الشوائب من العمود.

في المقابل ، تدخل بروتينات المجال P الصغيرة إلى مسام الخرزة ، وتسافر في مسار أطول ، وتتلاشى لاحقا. يشير الارتفاع في ذروة الامتصاص إلى شطف بروتينات المجال P.

اجمع الكسور الممسولة التي تحتوي على بروتينات المجال P ، والتي أصبحت الآن جاهزة لمزيد من التحليل.

اغسل المضخات والأنابيب الخاصة بنظام تنقية الكروماتوغرافيا السائلة عالي الأداء ، وقم بموازنة عمود كروماتوغرافيا استبعاد الحجم مسبقا باستخدام مخزن ترشيح الهلام. قم بحقن المجال P على العمود بمعدل تدفق يبلغ ملليلتر واحد في الدقيقة ، باستخدام حلقة فائقة أو حلقة ، اعتمادا على حجم العينة المركزة. بعد الانتهاء من الحقن ، قم بزيادة معدل التدفق إلى 2.5 ملليلتر في الدقيقة.

مع زيادة الكثافة الضوئية ، وخروج المجال P من العمود ، اجمع كسورا مقدارها 1.5 ملليلتر. عادة ما يتم مسح المجال P كثنائي