موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 4:28 دقيقة • October 30th, 2025
خذ ثقافة من Streptococcus mutans التي تعبر عن بروتين موسوم ب polyhistidine يفرز في الوسط.
قم بالطرد المركزي للثقافة واجمع المادة الطافية الغنية بالبروتين.
أضف كبريتات الأمونيوم واحتضنها مع التحريك لترسيب البروتينات عن طريق تقليل قابليتها للذوبان.
انقل المحلول إلى أنبوب ، جهاز طرد مركزي ، وتخلص من المادة الطافية.
أعد تعليق الحبيبات في مخزن مؤقت ملزم يحتوي على أملاح وإيميدازول منخفض لتثبيت البروتين.
قم بإزالة المحلول ضد المخزن المؤقت المرتبط الطازج لإزالة الأملاح الزائدة.
قم بالطرد المركزي للمحلول المبالغ فيه للحبيبات غير القابلة للذوبان ، ثم قم بتصفية المادة الطافية.
امزج المرشح مع راتنج التقارب المشحون بالنيكل واحتضنه للسماح بالارتباط الانتقائي للبروتين الموسوم بالبولي هيستيدين بأيونات النيكل.
قم بتحميل الخليط على عمود الكروماتوغرافيا واغسله بمخزن مؤقت للربط لإزالة البروتينات غير المرتبطة.
بعد ذلك ، أضف عازلة شطف تحتوي على نسبة عالية من الإيميدازول لإزاحة الهيستيدين من أيونات النيكل وإطلاق البروتين الموسوم ببولي هيستيدين.
اجمع هذا اللويت الذي يحتوي على البروتينات المنقاة.
قم بالطرد المركزي معلق المزرعة البكتيرية لمدة 20 دقيقة عند 10,000 مرة جم عند أربع درجات مئوية.
انقل المادة الطافية للثقافة إلى دورق زجاجي سعة ثلاثة لترات. لتركيز البروتينات من المادة الطافية للثقافة ، ضع المادة الطافية سعة لت
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية