موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 3:00 دقيقة • October 30th, 2025
خذ معلقا متجانسا من الجبن - المادة الميتة الغنية بالدهون من آفات السل ، والتي تؤوي البكتيريا الفطرية التي تتحمل الأدوية في جوهرها.
أضف دواء الاختبار إلى المتجانس والدوامة لتسهيل تفاعله مع مصفوفة الجبن.
ضع غرف متبرعة ومستقبلية تحتوي على حشوة غسيل الكلى السريع مفصولة بغشاء شبه منفذ في لوحة القاعدة.
قم بتحميل المتجانس المسننة للدواء في غرفة المتبرع وأضف المخزن المؤقت إلى غرفة الاستقبال.
ختم اللوحة واحتضان مع التناوب.
أثناء الحضانة ، ينتشر الدواء الحر عبر الغشاء ، ويصل إلى التوازن بين كلتا الغرفتين.
بمجرد الوصول إلى التوازن ، قم بتخفيف عينة المتبرع باستخدام المخزن المؤقت وعينة المستقبل باستخدام تجانس خال من الأدوية لتطبيع ظروف المصفوفة لقياس كمية الدواء.
أخيرا ، حدد تركيز الدواء واحسب جزء الدواء غير المرتبط أو فو.
يعكس fu الدواء المجاني المتاح للانتشار في الجبن والوصول إلى البكتيريا الفطرية التي تتحمل الأدوية.
أضف 6.5 ميكرولتر من مركب الاختبار المحضر إلى 643.5 ميكرولتر من المتجانس. لتحقيق التركيز النهائي لخمسة ميكرومولار ودوامة.
بعد ذلك ، ضع الإدخالات الحمراء في لوحة القاعدة. قم بإعداد الإدخالات لكل اختبار ، كل مركب ثلاثي.
أضف 200 ميكرولتر من المصفوفة المسننة للدواء في غرفة المتبرع الحمراء لكل ملحق أحمر. ثم أضف 350 ميكرولتر من PBS إلى كل غرفة استقبال.
ضع ختما لاصقا على اللوحة واحتضنه عند 37 درجة مئوية على الخلاط الحراري بمعدل 200 دورة في الدقيقة لمدة أربع ساعات. بعد الحضانة، اخلطي محتويات غرف المتبرع وجهاز الاستقبال برفق عن طريق سحب العينة لأعلى ولأسفل مرتين إلى ثلاث مرات. انقل 20 ميكرولتر من المتجانس من كل غرفة من الغرف المانحة إلى 20 ميكرولتر من PBS النظيف في أنبوب 1.5 ملليلتر.
وبالمثل ، قم بنقل 20 ميكرولتر من عينات PBS من غرف الاستقبال إلى 20 ميكرولتر من التجانس النظيف.
تلغي مطابقة المصفوفة الحاجة إلى منحنيين منفصلين لرؤية الألوان في التجانس و PBS ليتم إجراؤهما للتحليل الكمي. قد تترسب محتويات الغرفة المانحة بمرور الوقت. امزج المحتويات برفق عن طريق سحب العينة قبل إزالة الأغطية الصغيرة.