JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 3:09 د • October 30th, 2025
ابدأ بمزرعة بكتيرية ، وقم بإجراء التخفيف التسلسلي لتقليل كثافة الخلايا.
خذ جزءا صغيرا من التخفيف النهائي وقم باكتشافه على طبق أجار.
أضف حبات زجاجية معقمة ورج اللوحة برفق لضمان الفصل المكاني للخلايا ، وهو أمر ضروري للحصول على مستعمرات معزولة جيدا.
قم بإزالة الخرز الزجاجي ، ثم اقلب الطبق واحتضنه.
تتكاثر الخلايا الفردية وتشكل مستعمرات منفصلة ، مما يولد ثقافة وحيدة النسيلة تتكون فيها كل مستعمرة من مجموعة بكتيرية موحدة وراثيا.
اختر مستعمرات فردية وانقلها إلى أنابيب منفصلة تحتوي على وسط سائل.
احتضان الأنابيب مع التحريض. بعد الحضانة ، قم بتقييم تعكر كل ثقافة.
الخلايا البكتيرية المعلقة في الوسط تشتت الضوء ، مما يجعل الثقافات تبدو أكثر عكارا مع زيادة كثافة الخلايا.
حدد الأنبوب ذو أعلى تعكر ، مما يشير إلى كثافة البكتيريا وحيدة النسيلة ، للتطبيقات النهائية.
قم بتسمية الزجاجات الثلاث المحضرة ب 100 مل من LB Lennox Broth بالرقم واحد والثاني ورقم ثلاثة.
ماصة 0.1 ملليلتر من الثقافة البكتيرية الناتجة في زجاجة واحدة. قم بتغطية الزجاجة وقم بتأرجحها يدويا لمدة دقيقة واحدة للحصول على محلول متجانس. بعد ذلك ، ماصة 0.1 ملليلتر من الزجاجة رقم واحد في الزجاجة الثانية. مرة أخرى ، قم بتغطية الزجاجة وقم بتأرجحها باليد لمدة دقيقة واحدة. قم بإجراء التخفيف الأخير عن طريق سحب 0.1 ملليلتر من الزجاجة رقم اثنين في الزجاجة رقم ثلاثة. قم بتغطية الزجاجة ورجها باليد لمدة دقيقة واحدة.
ثم ماصة 20 ميكرولتر من المحلول على كل طبق من أطباق بتري الأربعة. بعد ذلك ، ضع أربع حبات زجاجية معقمة قطرها ثلاثة ملليمترات في كل طبق من أطباق بتري. أغلق أغطية أطباق بتري ورجها باليد لمدة دقيقة واحدة.
عند الانتهاء ، اقلب أطباق بتري رأسا على عقب واحتضن الأطباق في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
باستخدام ملعقة من الفولاذ المقاوم للصدأ ، اختر البكتيريا أحادية النسيلة الناتجة من أطباق بتري الأربعة وضعها في الأنابيب السبعة المتبقية التي تحتوي على 12.5 مل من مرق LB Lennox. اترك الأنابيب في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة ، ثم اختر الأنبوب الذي يحتوي على أكبر تشتت للضوء باستخدام طريقة قياس الألوان المرئية.