إنتاج وترسيب جراثيم العصيات الرقيقة على أساس الهباء الجوي

ابدأ بثقافة Bacillus subtilis ، وهي بكتيريا مكونة للأبواغ شديدة المقاومة.

قم بتلقيح المزرعة في وسط محدود المغذيات واحتضان بالتهوية للحث على الأبواغ.

تنتج الخلايا البوغية جراثيم نائمة ذات طبقات واقية.

انقل المزرعة إلى أنبوب وجهاز طرد مركزي لحبيبات الجراثيم. قم بإزالة المادة الطافية التي تحتوي على الخلايا المتبقية والحطام.

اغسل الحبيبات بالماء المقطر المعقم ، وكرر الطرد المركزي ، وأعد تعليق الجراثيم في ماء معقم.

باستخدام مجهر تباين الطور ، تأكد من نقاء الأبواغ عن طريق تحديد الجراثيم الساطعة والتحقق من عدم وجود ملوثات.

قم بإجراء تخفيفات متسلسلة للجراثيم ، ولوحة على أجار المغذيات ، واحتضان للسماح بإنبات الجراثيم القابلة للحياة في المستعمرات. عد المستعمرات لتحديد تركيز الأبواغ.

بناء على هذا التركيز, اضبط كمية البوغ وقم بتحميل العينة المخففة في فوهة الهباء الجوي. قم برشه على سطح زجاجي معقم حيث يجف المعلق بسرعة لتشكيل طبقة أحادية رقيقة وموحدة من الجراثيم.

لإنتاج الأبواغ ، قم بنقل مزرعة ليلية سعة 5 ملليلتر من سلالة B.subtilis ذات الصلة مع المضادات الحيوية المناسبة إلى 200 مل من وسط الأبواغ السائل مزدوج القوة من Schaeffer وزراعته بتهوية قوية عند 37 درجة مئوية لمدة 72 ساعة على الأقل أو أكثر حتى يتم نثر أكثر من 95٪ من المزرعة. حصاد الجراثيم في أنابيب سعة 15 مليلترا عن طريق الطرد المركزي عند 3000 جم ل