JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 2:07 د • October 30th, 2025
خذ عينات منفصلة من خلايا الكيسات الزنجارية الحية والميتة.
امزج العينات لإنشاء مجموعة سكانية مجمعة.
يحتوي Microcystis على phycocyanin ، وهو صبغة ذاتية الفلورسنت تظل سليمة في الخلايا الحية ولكنها تتحلل في الخلايا الميتة.
دوامة العينة لكسر الكتل وتوليد تعليق موحد أحادي الخلية.
أضف مسبارا فلوريا غير منفذ لغشاء الخلية ومرتبط بالحمض النووي ، واحتضن العينة في الظلام لمنع التبييض الضوئي.
يدخل المسبار بشكل انتقائي الخلايا الميتة من خلال أغشيتها التالفة ويرتبط بالحمض النووي داخل الخلايا.
قم بتشغيل العينة من خلال مقياس التدفق الخلوي لقياس التألق الذاتي للفيكوسيانين وتألق مسبار الحمض النووي باستخدام ليزر الطول الموجي المثير المناسب.
تنبعث الخلايا الحية من التألق الذاتي القوي للفيكوسيانين ولكنها لا تظهر أي إشارة مسبار.
في المقابل ، تعرض الخلايا الميتة انبعاثا أقل للصبغة ومضان مسبار مرتفع ، مما يؤكد تلف الغشاء.
يتيح ذلك التعرف على الخلايا الحية الغنية بالصبغة من الخلايا الميتة.
لتحسين امتصاص خلية المسبار الجزيئي ، قم بتعريض نصف الزراعة الأحادية المعدة مسبقا للظروف المناسبة لتوليد تحكم ميت. تحقق من الاختلافات في البيئة الدقيقة للعينة لتأكيد موت المزرعة. ثم قم بتقسيم تكوين المستعمرة كما هو موضح للتو.
بعد ذلك ، حدد ليزر 488 نانومتر جنبا إلى جنب مع كاشف يمكنه تسجيل التألق من مجسات الحمض النووي الأخضر والبرتقالي. والليزر 640 نانومتر لتسجيل إشارات phycocyanin من خلال أجهزة الكشف الخاصة بها.