موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 3:37 دقيقة • October 30th, 2025
خذ مزرعة لاكتيس الملبنة التي تعبر عن الببتيداز المرتبط بالغشاء NisP.
امزج المزرعة مع وسط غني بالمغذيات.
يضاف الأجار المصهور ويخلط ويسكب في طبق لتوزيع L. lactis بالتساوي في أجار.
بمجرد أن تصلب ، ضع الآبار في الأجار.
بعد ذلك ، خذ الإشريكية القولونية المؤتلفة التي تنتج متغيرات سلائف من النوع البري أو المعدلة من الببتيد المضاد للميكروبات نيسين.
جهاز طرد مركزي لحبيبات البكتيريا ، والتخلص من المواد الطافية ، وإعادة تعليق الكريات في المخزن المؤقت.
صوتنة لتحلل البكتيريا ، وأجهزة الطرد المركزي ، ونقل المواد الطافية إلى أنابيب جديدة.
تطبيع المحللات إلى كثافة بصرية متساوية باستخدام المخزن المؤقت لضمان مستويات الببتيد المتسقة.
ماصة كل عينة في آبار أجار فردية واحتضان العينات.
أثناء الحضانة ، تنتشر ببتيدات سلائف Nisin في الأجار ويتم شقها بواسطة NisP ، مما يولد نيسين ناضجا.
يمنع النيسين الناضج نمو L. lactis ، ويشكل هالات واضحة حول البئر.
قارن أحجام الهالة لتقييم النشاط المضاد للميكروبات لمتغيرات النيسين.
أضف مليلترا واحدا من زراعة Lactococcus lactis المسبقة إلى 25 ملليلترا من مرق 2X M17 الذي يحتوي على 10 ميكروغرام لكل مليلتر من الكلورامفينيكول واثنين بالمائة من الجلوكوز. ثم أضف 25 مل من الأجار المنصهر الفاتر ، واخلطه ، واسكب المحلول في طبق بتري كبير. الحفاظ على ظروف معقمة ، جفف الطبق لمدة 10 إلى 15 دقيقة.
ثم
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية