تحضير وسط بلغم اصطناعي لمحاكاة التليف الكيسي البلغم الرئوي خارج الجسم الحي

التليف الكيسي (CF) هو اضطراب وراثي يتسبب في تراكم مخاط سميك ولزج في الرئتين ، مما يشكل بلغم يدعم نمو الميكروبات المسببة للأمراض.

لتحضير بلغم التليف الكيسي الاصطناعي ، خذ محاليل ذات خصائص كيميائية حيوية رئيسية.

يحتوي مزيج الميوسين على الميوسينات ، وهي بروتينات سكر عالية الوزن الجزيئي ، لتكرار لزوجة بلغم التليف الكيسي وتعزيز الالتصاق الميكروبي.

يوفر المزيج الكيميائي الأيونات والجلوكوز لدعم التمثيل الغذائي الميكروبي.

يوفر المزيج البيولوجي العناصر الغذائية لنمو الميكروبات.

امزج الكل لتشكيل وسط البلغم الاصطناعي (ASM).

أضف عامل تخزين مؤقت للحفاظ على درجة حموضة حمضية معتدلة تساعد على بقاء مسببات الأمراض.

للتعقيم المتوسط ، انقل ASM إلى غرفة ترشيح فراغية باستخدام مرشح غشاء.

قم بالتصفية تحت التحريض لتجنب تراكم الميوسين ومنع انسداد المرشح.

يسحب الفراغ الوسيط من خلال المرشح ، ويزيل الملوثات الميكروبية والمجاميع الجزيئية الكبيرة.

ASM جاهز لزراعة الميكروبات المرتبطة بالتليف الكيسي.

قم بإعداد وسط بلغم اصطناعي عن طريق إضافة 250 مل من ASCM إلى زجاجة سعة 1 لتر تحتوي على ASMM. ثم أضف 250 مل من ASBM إلى الزجاجة المتوسطة. قم بمعايرة الوسط باستخدام مخزن مؤقت MOPS أساسي 1 مولار للوصول إلى درجة حموضة 6.3 على ورق الأس الهيدروجيني.

ضعي وسط البلغم الاصطناعي في الثلاجة على حرارة 4 درجات مئوية حتى الترشيح. بعد ذلك ، لبدء عملية الترشيح ، قم بنقل 200 مل من وسط البلغم الاصطناعي غير المصفى إلى نظام ترشيح فراغ بفلتر بحجم المسام 0.22 ميكرومتر. بعد توصيل نظام الترشيح بمضخة التفريغ ، قم بتشغيل مضخة التفريغ. ثم ضع الغرفة على شاكر مداري ، واهتز بمعدل 90 دورة في الدقيقة في غرفة باردة عند 4 درجات مئوية.

قم بتغيير الفلتر بعد تصفية 350 مل من الوسط للتغلب على مشكلة الانسداد. بعد تصفية كمية كبيرة ، أضف 150 مل إضافي من الوسط للترشيح. كرر الترشيح بغرف إضافية حتى يتم تصفية جميع الوسائط.