القياس الكمي للوحدات المكونة للمستعمرة للبكتيريا المرتبطة بالقناة الهضمية في ذبابة الفاكهة

ابدأ بصفيحة صغيرة تحتوي على متجانسات محضرة من ذبابة الفاكهة الذبابة. كان هذا الذباب يؤوي مجموعة خاضعة للرقابة من بكتيريا معينة في أمعائه.

تحتوي المتجانسات على أنسجة ذبابة متحللة وبكتيريا الأمعاء.

استنشاق البكتيريا العالقة وتخفيفها بشكل متسلسل عبر ألواح دقيقة متعددة.

اكتشف كميات صغيرة من كل تخفيف على ألواح أجار ، مما يضمن بقاء القطرات منفصلة.

احتضان للسماح للبكتيريا بالتكاثر في مستعمرات مرئية.

التقط صورا للألواح لتحديد وحدات تكوين المستعمرة (CFUs) ، والتي تمثل عدد الخلايا البكتيرية القابلة للحياة القادرة على تكوين مستعمرات فردية.

باستخدام برنامج تحليل الصور ، قم بمحاذاة كل صورة باستخدام خط مرجعي ، وحدد حدودا ، وقم بتطبيق شبكة موحدة لتقسيمها إلى مناطق عد ، كل منها يتوافق مع بقعة واحدة.

اضبط عتبة السطوع لتمييز المستعمرات الفردية عن الخلفية ، ثم قم بتشغيل التحليل لحساب المستعمرات في كل بقعة وتحديد وحدات CFUs.

ضع ثلاث ألواح مستطيلة لنمو أجار MRS مع فتح أغطيتها في خزانة السلامة الحيوية لتجف لمدة 10 دقائق على الأقل. قم بإعداد لوحين مخففين عن طريق إضافة 100 ميكرولتر من PBS إلى كل بئر من صفيحة معقمة ذات 96 بئرا باستخدام ماصة ذات 96 قناة. قم بتحميل حامل من أطراف P-20 على الماصة ذات 96 قناة.

قم بعمل تخفيف بنسبة 1:10 عن طريق شفط 11.1 ميكرولتر من المتجانس من لوحة العينة. الآن ، قم بتوزيعه في أول لوحة تخ