مقايسة نمو البكتيريا المحدودة للمعادن لدراسة دور الجينات المستجيبة للمعادن

خذ البكتيريا من النوع البري والبكتيريا الطافرة التي تفتقر إلى جين معين مستجيب للمعادن موجود في النوع البري.

تزرع البكتيريا في وسائط مستنفدة للمعادن لاستنفاد احتياطياتها المعدنية الداخلية.

في هذه البيئة المستنفدة للمعادن ، يتم تنشيط الجين المستجيب للمعادن في البكتيريا من النوع البري ويعبر عن مستقبل سطحي غائب في البكتيريا الطافرة.

تمييع الثقافات لضمان كثافة خلايا موحدة.

خذ طبقا متعدد الآبار يحتوي على مركب البروتين المعدني.

أضف الثقافات المخففة إلى الآبار.

احتضان اللوحة داخل قارئ الألواح الذي يتم الحفاظ عليه عند درجة حرارة خاضعة للرقابة مع الاهتزاز لتعزيز النمو الأمثل للبكتيريا.

قياس الامتصاص على فترات منتظمة لمراقبة نمو البكتيريا بمرور الوقت.

في البكتيريا من النوع البري ، يتيح المستقبل المعدني استخراج أيون المعدن من المركب ، مما يدعم نموه.

تظهر البكتيريا الطافرة نموا مقيدا لأنها تفشل في استخراج أيون المعدن من المجمع بدون المستقبلات المعدنية.

أضف 10 ميكرولتر من الخلط المسبق 10X و 90 ميكرولتر من آلية التنمية النظيفة إلى كل من الآبار الثلاثة للضوابط الفارغة.

بمجرد أن تتضاعف الثقافات الموجودة في قارورة الذراع الجانبية ، أضف 100 ميكرولتر من كل مزرعة إلى بئر غير مستخدم في الصفيحة الدقيقة ، وقم بقياس الكثافة الضوئية عند 600 نانومتر.

بعد حساب الكمية الصحيحة من التخفيف المطلوب لإحضار الثقافات إلى كثافة ب