موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:51 دقيقة • October 30th, 2025
ابدأ بسلالة المستدمية النزلية غير القابلة للكتابة ، وهي مسببات أمراض في الجهاز التنفسي البشري.
ضع المزرعة البكتيرية على وسائط انتقائية غنية بالمغذيات واحتضانها في ظل ظروف غنية بثاني أكسيد الكربون2 لتقليد بيئة الجهاز التنفسي.
أثناء الحضانة ، تستخدم البكتيريا العناصر الغذائية وتتكاثر ، وتشكل مستعمرات.
نقل مستعمرة إلى وسائط سائلة انتقائية واحتضان لتعزيز نمو البكتيريا في الثقافة السائلة.
انقل الحصة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق.
جهاز طرد مركزي لفصل البكتيريا والتخلص من المادة الطافية.
أعد تعليق البكتيريا في مخزن مؤقت ، وقم بجهاز الطرد المركزي مرة أخرى لغسل البكتيريا وفصلها ، وتخلص من المادة الطافية المتبقية المحتوية على الوسائط.
أعد تعليق البكتيريا في المخزن المؤقت وتخفيفها.
باستخدام مقياس الطيف الضوئي ، قم بقياس الكثافة الضوئية عند 600 نانومتر لتقدير تركيز البكتيريا.
ضع المزرعة البكتيرية المخففة على وسائط انتقائية واحتضنها لتشكيل مستعمرات.
عد المستعمرات لحساب وحدات تكوين المستعمرة لتحضير اللقاح للاستخدام في المستقبل.
ضع طبق NTHI على طبق أجار الشوكولاتة. احتضن الطبق رأسا على عقب طوال الليل عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون. في اليوم التالي ، قم بزراعة البكتيريا في مرق ضخ الدماغ والقلب.
ثم ، في أنبوب طرد مركزي دقيق ، أضف مليلترا واحدا من المرق. قم بتدوير المزيج على حرارة 4,000 جم لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات في مليلتر واحد من PBS. كرر خطوة الغسيل هذه مرة أخرى.
بعد ذلك ، قم بتخفيف 100 ميكرولتر من المحلول المعلق في 900 ميكرولتر من PBS وقياس امتصاص المزرعة عند 600 نانومتر. استخدام هذه المعلومات لضبط اللقاح إلى 20 مليون CFUs في مليلتر.
بعد ذلك ، حدد جدوى اللقاح و CFUs للتلقيح. قم بزراعة واحد إلى عشرة تخفيفات متسلسلة من المرق على أطباق أجار الشوكولاتة ، واحتضان الأطباق طوال الليل.