JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 2:17 د • October 30th, 2025
ابدأ بفأر مرح بالقصبة الهوائية المكشوفة. أصيبت رئتا الفأر مسبقا ببكتيريا غير قابلة للكتابة بالمستدمية النزليةe، وهي بكتيريا مسببة للأمراض.
أدخل قسطرة في القصبة الهوائية وقم بتثبيتها بحقنة مملوءة بمخزن الغسيل.
قم بتطبيق مخزن الغسيل الذي يحتوي على مضاد للتخثر لمنع تكون جلطات الدم وسكر للحفاظ على سلامة الخلايا.
استنشق بلطف لاستعادة سائل الغسيل القصبي السنخي الذي يحتوي على خلايا الدم الحمراء والخلايا المناعية ومسببات الأمراض المتبقية.
كرر الإجراء واجمع سائل الغسيل المستعاد في تعليق واحد.
خذ حصة من التعليق المجمع وجهاز الطرد المركزي لفصل الخلايا. تخلص من الطواقي.
أعد تعليق الخلايا في مخزن مؤقت للتحلل لتحليل خلايا الدم الحمراء بشكل انتقائي.
جهاز طرد مركزي لفصل الخلايا المتبقية والتخلص من المادة الطافية التي تحتوي على الحطام.
أعد تعليق الخلايا المتبقية في مخزن مؤقت.
المعلق النهائي ، الذي يحتوي على خلايا مناعية وبكتيريا متبقية ، جاهز للتحليل النهائي.
كشف الجزء البطني من الرئة للوصول إلى القصبة الهوائية. قم بتنبيب القصبة الهوائية بقسطرة قياس 20.
باستخدام القسطرة ، غرس 0.8 مل من المخزن المؤقت BALF واجمع الغسيل عن طريق شفط الأسنان. كرر هذا الإجراء ثلاث مرات أخرى ، مع تجميع مجموعات الغسيل الأربع في تعليق واحد.
خذ 100 ميكرولتر وقم بالتدوير لأسفل لمدة دقيقتين عند 2,000 دورة في الدقيقة.
قم بإزالة المادة الطافية وأعد تعليقها في المخزن المؤقت لتحلل كرات الدم الحمراء. قم بتدويرها لأسفل وأعد تعليق الحبيبات باستخدام 1X PBS.