تخليق مستضدات بروتين الغشاء المستقرة بالقرص النانوي باستخدام نظام خال من الخلايا

خذ نظاما خاليا من الخلايا البكتيرية يفتقر إلى الهياكل الخلوية السليمة ولكنه يحتفظ بالمكونات الجزيئية اللازمة للنسخ والترجمة في المختبر .

إدخال البلازميدات التي تشفر مستضد البروتين الغشائي وبروتين السقالة ، جنبا إلى جنب مع الدهون الفوسفورية والبوليمرات الاصطناعية.

استكمل الخليط ب ATP و GTP ومزيج الأحماض الأمينية لبدء تخليق البروتين.

في نفس الوقت ، قم بإعداد محلول علف غني بمزيج الأحماض الأمينية.

قم بتحميل الخليط في الغرفة الداخلية ومحلول التغذية في الغرفة الخارجية لجهاز غسيل الكلى ثنائي الحجرة.

أثناء الحضانة ، تنتشر الركائز من الغرفة الخارجية إلى الغرفة الداخلية من خلال الغشاء شبه المنفذ ، مما يسهل نسخ البلازميد وترجمة البروتين.

يقوم بروتين السقالة بتجميع الدهون الفوسفورية والبوليمرات في أقراص نانوية دهنية ويسهل طي ودمج MPA في هذه الهياكل.

تنتشر المنتجات الثانوية المتولدة أثناء التفاعل في الغرفة الخارجية ، مما يحافظ على الظروف المثلى لتكوين الميكروپا الميكانيكي المستقر بالأقراص النانوية.

قم بإعداد MOMP-tNLPs باستخدام طريقة خالية من الخلايا.

قم بإذابة المخزن المؤقت لإعادة التكوين من مجموعة تعبير البروتين الخالي من الخلايا قبل ساعتين من ضبط التفاعل ، وأضف مثبط البروتياز الخالي من EDTA إلى المخزن المؤقت. استخدم مجموعة مصممة لتشغيل خمسة تفاعلات بحجم ملليلتر واحد. لكل تفاعل بحجم ملليلتر واحد ، أضف