تنقية تدرج الكثافة للكريات البلاستوبكتيرية الزرقاء

الجليوبولات البلاستوبولية هي قطرات غنية بالدهون في سيتوبلازم البكتيريا الزرقاء.

يخزنون الدهون المحايدة داخل نواة كارهة للماء ، وتحيط بها طبقة دهنية أحادية البرمائية مع بروتينات هيكلية وأنزيمية مدمجة. يتم تعبئة الدهون المخزنة أثناء الإجهاد لدعم الوظائف الخلوية.

لعزلها ، ابدأ بجزء من الجلوبول البلاستيوي الخام الذي تم الحصول عليه من البكتيريا الزرقاء. يتم إثراء هذا الجزء في plastoglobules ويتضمن بعض البروتينات الملوثة المتبقية.

امزج هذا الجزء مع محلول السكروز الأكثر كثافة وانقله إلى أنبوب طرد مركزي فائق.

تراكب بمحلول سكروز أخف لإنشاء تدرج كثافة متقطع.

جهاز طرد مركزي بسرعة عالية في ظل الظروف الباردة لمنع التدهور الحراري للكريات البلاستوبولية.

يفصل التدرج المكونات حسب الكثافة: تطفو الجلوبات الغنية بالدهون ومنخفضة الكثافة إلى الأعلى ، بينما تغرق الملوثات الغنية بالبروتين الأكثر كثافة.

اجمع الكريات البلاستوبولية النقية وقم بتجميدها في وسط تجميد للحفاظ على هيكلها.

يحفظ في درجات حرارة منخفضة للغاية للاستخدام طويل الأمد.

لحصاد البكرات الزرقاء النقية من البكتيريا الزرقاء ، قم بإنشاء تدرج سكروز ، كما ذكرنا سابقا ، باستخدام 500 ميكرولتر من الجلوبولات البيضاء الخام ، و 750 ميكرولتر من R 0.7 المتوسط ، و 750 ميكرولتر من R 0.2 المتوسط. بعد الطرد المركزي ، اجمع الجلوبات الناعمة النقية في أنبوب سعة 1.5 ملليلتر وقم بتقطيع الجلوبات الناعمة النقية. بمجرد الانتهاء من ذلك ، قم بتجميد كميات البلوبولات النقية في النيتروجين السائل وتخزينها مباشرة عند درجة حرارة 80 درجة مئوية تحت الصفر أو قم بتجميد الليوبلد إلى مسحوق جاف.