موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 3:22 دقيقة • October 30th, 2025
ابدأ بالديدان البالغة الخالية من الجراثيم C. ايليجانس المعلقة في الوسائط.
أدخل بكتيريا الاختبار واحتضانها.
عندما تتغذى الديدان ، تدخل البكتيريا إلى تجويف الأمعاء وتلتصق بالظهارة.
جهاز طرد مركزي لإزالة الديدان وإزالة البكتيريا غير المبتلعة.
أعد التعليق في المخزن المؤقت وجهاز الطرد المركزي وإزالة البكتيريا المتبقية غير المبتلعة.
أضف الوسائط التي تحتوي على الإشريكية القولونية المقروعة بالحرارة واحتضنها.
أثناء الرضاعة ، يقوم الإشريكية القولونية المقتولة بالحرارة بإزاحة بكتيريا الاختبار غير الملتصقة وطردها من تجويف الأمعاء.
جهاز طرد مركزي وإزالة المادة الطافية التي تحتوي على البكتيريا المطرودة.
يغسل بالمخزن المؤقت وجهاز الطرد المركزي ويزيل المادة الطافية.
قم بتبريد الديدان على الجليد للحث على الشلل ، مما يمنع المزيد من الابتلاع.
أضف محلول مبيض واحتضان لقتل البكتيريا الخارجية المتبقية.
قم بإزالة المبيض وأضف المخزن البارد.
جهاز طرد مركزي وإزالة المادة الطافية للتخلص من المبيض المتبقي.
تحتفظ الديدان الآن فقط بكتيريا الاختبار القابلة للحياة الملتصقة بالظهارة المعوية ، مما يتيح القياس الكمي للاستعمار.
ابدأ بإعادة تعليق عينة الدودة في مليلتر واحد من M9TX-01 في أنبوب طرد مركزي دقيق. اجمع الديدان البالغة عن طريق الطرد المركزي وتخلص من المادة الطافية. باستخدام نفس معلمات الطرد المركزي ، اشطف الديدان مرتين بملليلتر واحد من M9TX-01 ومرة واحدة بمليلتر واحد من المخزن المؤقت للدودة M9 لتقليل البكتيريا الخارجية. بعد ذلك ، أعد تعليق كل عينة في مليلتر واحد من S وسط بالإضافة إلى 2X OP50 المقتول بالحرارة في أنبوب مزرعة. احتضان الأنابيب على حرارة 25 درجة مئوية لمدة 20 إلى 30 دقيقة لتمرير البكتيريا غير الملتصقة من الأمعاء.
بعد الحضانة ، اشطف الديدان المطهرة مرتين بملليلتر واحد من M9TX-01 البارد وتخلص من المادة الطافية. ضع الأنابيب على الجليد لمدة 10 دقائق لشل الديدان. بعد ذلك ، أضف مليلترا واحدا من المخزن المؤقت للدودة M9 المثلج مع مبيض غير معطر إلى كل أنبوب.
احتضن الأنابيب على الثلج لمدة لا تقل عن 10 دقائق لقتل البكتيريا الخارجية. تخلص من مخزن التبييض وأعد الأنابيب إلى الجليد لمنع الديدان من الضخ. بعد ذلك ، أضف مليلترا واحدا من M9TX-01 البارد إلى كل أنبوب وجهاز طرد مركزي لمدة خمس ثوان في جهاز طرد مركزي صغير. أعد الأنابيب إلى الثلج وقم بإزالة المادة الطافية. كرر هذه الخطوة مرة واحدة.