التعطيل الميكانيكي للديدان الفردية لتقييم التباين في تفاعلات البكتيريا المضيفة

ابدأ بديدان C. elegans البالغة المتطابقة مع العمر والمعقمة والمتولية حديثا مع بشرة متخللة ، معلقة في المخزن المؤقت.

هذه الديدان مصابة بالبكتيريا في الأمعاء.

خذ صفيحة بئر عميقة تحتوي على جزيئات كاشطة في المخزن المؤقت وانقل دودة واحدة إلى كل بئر.

قم بتغطية الطبق بغشاء مانع للتسرب وغطاء.

احتضان اللوحة على درجة حرارة منخفضة لمنع ارتفاع درجة الحرارة أثناء تمزق الأنسجة.

اضغط على الغطاء لإغلاق الآبار.

باستخدام معطل الأنسجة ، قم بهز اللوحة ميكانيكيا. تعمل الجزيئات الكاشطة على تعطيل أنسجة الدودة ، وتطلق بكتيريا الأمعاء.

اضغط على اللوحة وقم بالطرد المركزي لحبيبات المحتويات.

امزج المحتويات لتوزيع البكتيريا بالتساوي ، ثم انقلها إلى الآبار الطازجة.

تمييع التعليق البكتيري بشكل متسلسل في المخزن المؤقت.

ضع التخفيفات على ألواح أجار واحتضنها للسماح بتكوين المستعمرة.

عد المستعمرات لتحديد التباين في الأحمال البكتيرية المعوية عبر الديدان الفردية.

للتحضير للتعطيل الميكانيكي للديدان ، احصل على صفيحة معقمة بعمق ملليلتر بئر 96 بئرا وغطاء صفيحة سيليكون.

استخدم ملعقة مغرفة معقمة لإضافة كمية صغيرة من كربيد السيليكون المعقم 36 شبكيا إلى كل بئر بحيث لا تغطي الشبكة بالكاد قاع البئر. أضف 180 ميكرولتر من المخزن المؤقت للدودة M9 إلى كل بئر. قم بتسمية الأعمدة والصفوف ، ثم قم بتغطية اللوحة بشكل غير محكم بغطاء لوحة السيليكون.

بعد ذ